- 上一篇：培养基发酵程度对热胁迫下果蝇生存率及生殖率的影响
- 下一篇：小鼠巨噬细胞集落刺激因子 (mCSF1)单克隆抗体的生物活性研究
引言
虎杖，别名假川七、土川七、红三七、三七或日本蓼，为蓼科植物虎杖（Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.）的干燥根茎和根[1]。该植物主要分布于西北、华东、华中、华南及西南等地，春、秋二季采挖，除去须根，洗净，趁鲜切短段或厚片，晒干。它具有利湿退黄，清热解毒，散瘀止痛，止咳化痰的功效；并且可用于湿热黄疸，淋浊，带下，风湿痹痛，痈肿疮毒，水火烫伤，经闭，症瘕，跌打损伤，肺热咳嗽。虎杖的有效成分主要是大黄素、白藜芦醇、白藜芦醇甙、迷人醇、原儿茶酸等。其中白藜芦醇的医疗价值非常高，它是一种具有重要生理活性的多酚类化合物[2]。药理学研究表明，白藜芦醇具有保护肝脏、降血脂、改善心血管疾病等作用[3]。被广泛用于医疗保健、化妆品等行业，其产品展现出美好的前景[4]。
白藜芦醇现代分离提纯工艺包括：大孔吸附树脂分离[5]，高效液相色谱法、酶辅助提取、凝胶装柱法、化学合成法、超临界CO2超声萃取、薄层色谱、超声波辅助有机溶剂提取法、高速逆流色谱和薄层层析、双水相萃取法等。双水相有机溶剂萃取的优点是，操作相对简单，适用性广，提取率高。
本实验采用双水相法分离提纯白藜芦醇[6]，并且通过一系列单因素试验考察丙酮浓度、硫酸铵浓度、pH、温度四个因素对白藜芦醇粗提取液中的白藜芦醇萃取率的影响[7]。在确定合适提取条件的基础上，通过响应面试验设计进一步对粗提取液中白藜芦醇分离工艺条件进行优化，最终确定白藜芦醇提取条件的最佳组合、关键因素及其交互作用，以期能提高白藜芦醇的萃取率，为白藜芦醇工艺研究的进行提供较好的支撑[8]。
1. 材料与方法
1.1 实验材料与仪器
虎杖，于周口市同和堂药店购买；
白藜芦醇标准品购于上海金穗生物科技有限公司；
KQ-2200超声清洗器 昆山市超声仪器有限公司
SHZ-D循环水真空泵 郑州市亚荣仪器有限责任公司
AR224CN奥豪斯电子天平 深圳市怡华新电子有限公司
UV-5100紫外可见分光光度计 上海元析仪器有限公司
KQ-B玻璃仪器气流烘干器 巩义市予华仪器有限责任公司
另外无水乙醇、丙酮、硫酸铵、盐酸、氢氧化钠、pH试纸、滤纸、烧杯、量筒、玻璃棒、分液漏斗、铁架台、温度计、擦镜纸、比色皿、锥形瓶、容量瓶、试剂瓶等，以上均为周口师范学院生命科学与农学学院实验室提供。
1.2实验方法
1.2.1配制标准品溶液
准确称取白藜芦醇标准品1.6 mg，将标准品用70%的乙醇定容于100 mL容量瓶中，摇匀即得到浓度为0.016 mg/mL的标准品对照液[5]。
1.2.2检测最适波长
取白藜芦醇标准对照液，以乙醇为参比，在250-500 nm波长之间每隔3分钟对其进行一次光谱扫描。光谱扫描显示的结果是：标准对照液在306-308之间出现最大吸收，标准品对照液在306 nm 波长处有最大吸收，由此确定检测的最适波长为306 nm。
1.2.3白藜芦醇标准曲线[9]
以浓度C作为横坐标，吸光A作为纵坐标，绘制标准曲线，结果如图1，得到的标准曲线方程为：Y= 0.1071X-0.0316 （R2 = 0.994）
1.2.4原材料处理
选取干燥无霉变的虎杖，置于粉碎机中，在1500 r/min的转速下粉碎2 min，使其为粉末状，粉粹后再过筛，取出置于广口瓶中备用。准确称量20g虎杖粉末，采用超声波辅助有机溶剂提取虎杖中的白藜芦醇，设定为温度48℃、液料比1：20、乙醇浓度70%、,源Z自+751=文)论(文]网[www.751com.cn超声处理时间为50min[10]。将超声波提取后的溶液用循环水真空泵过滤，弃掉滤渣，得到的滤液即为白藜芦醇粗提取液。