牛蒡榨菜腌制初期优势嗜盐细菌耐盐特性研究(2)

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2.6电泳检测PCR扩增产物 4

2.7 PCR扩增产物胶回收 4

2.8 胶回收产物电泳检测 5

2.9 细菌16S rRNA基因的检测 5

2.10 16S rRNA基因序列分析以及系统发育树的构建 5

2.11 细菌一步生长曲线的测定 5

2.12 流式细胞仪测定不同盐浓度对于细菌的影响 5

3.结果与分析 5

3.1 形态特征 6

3.2 电泳分析 7

3.3 16S rRNA基因片段分析及系统发育树的构建 8

3.4 一步生长曲线的绘制 9

3.5 流式细胞仪测定不同盐浓度下细菌的死亡率 10

4.讨论 12

参考文献 13

致谢 14

引言：

牛蒡为菊科，牛蒡属，两年生草本,药食两用植物。牛蒡的根、叶可供人食用，其根、茎、叶、种子可入药[1-2]。牛蒡子作为传统中药，其中含有木脂素，牛蒡苷及苷元等成分，具有解毒、散热、滑肠通便的功效[3]。牛蒡的根和叶中含蛋白质、淀粉、菊糖及酚羟基物质，具有抗菌的功效[4]。之前的研究表明，经常食用牛蒡根可促进血液循环，清除血液毒素，降低胆固醇和血糖，防止中风和高血压。牛蒡中含有的菊糖适合糖尿病人长期食用，牛蒡因能很好的预防和抑制癌症和尿毒症，而被称为大自然的最佳清血剂[5]。

嗜盐微生物是一类适应高盐浓度并能在该条件下生长的细菌，主要生长于盐湖、盐碱湖、死海、盐场和腌制品等高盐环境中[6,9]。根据细菌在不同盐浓度中的耐受情况，Kushner DJ将嗜盐细菌分为耐盐菌、极端嗜盐菌、中度嗜盐菌、弱嗜盐菌和非嗜盐菌。中度嗜盐菌是指能在0.5moL/L和0.25moL/L的NaCl浓度之间生长最佳，但最适盐浓度范围会随着环境条件的改变而有所不同的细菌[7-8]。早期研究高盐环境微生物时，人们较关注嗜盐古菌，且研究主要集中在盐湖、盐田和盐土等环境中[9-11]。然而，中度嗜盐菌有更广的分布和较宽的耐盐范围，是更能适应高盐浓度的一类细菌[12]。目前，对牛蒡腌制盐卤中中度嗜盐菌的研究还不多见，牛蒡为徐州特产，具有独特的口感和较高的营养价值。通过腌制，既能丰富牛蒡的风又能延长牛蒡的保存时间，但盐浓度过高，可能会使盐卤中的嗜盐菌失去活性，影响牛蒡榨菜腌制的过程及形成的风。本实验通过一系列微生物和分子实验方法，主要对牛蒡腌制初期盐卤中的嗜盐微生物进行研究，为牛蒡榨菜的腌制提供一定的理论基础。

流式细胞术（Flow cytometer FM）是目前在微生物检测中常用的方法，其原理是利用流式细胞仪对微生物进行分析和选择的技术[13]。流式细胞仪使细菌细胞排成单列，逐个通过不同光束来对每个细胞进行检测，从而分析细胞的各项参数，包括细胞大小、数量、核酸性质、内部颗粒性状等[14-15]。具有灵敏度高、使用方便、操作时间短、应用广泛等特点[16]。本实验利用流式细胞仪检测不同NaCl浓度下，嗜盐细菌细胞的死活比。了解嗜盐细菌在不同盐浓度环境下的生长情况，确定嗜盐菌的最适生长盐浓度，从而更好的控制牛蒡榨菜腌制过程中NaCl的使用量。

1试验材料