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摘要 从中国东海海域采集海水，分离到一株具有降解木质素能力的菌株，将其命名为 CK。经鉴定该菌株为 G+，无鞭毛，在海水培养基上菌落呈乳黄色，隆起，边缘光滑。利用 PCR对该菌株16SrDNA进行扩增并测序，并在EzTaxon Server数据库中与有较高同源性的菌株序列进行比对，并使用Mega软件对系统发育树进行构建与分析。得知该菌株序列与Arthrobacter nicotianae 相似性达 99％。进一步研究该菌株的形态特征，生理生化等，其最适生长温度为 35°C，最适 pH 为7.5，最适盐浓度为 25 g/L。其符合 Arthrobacter 属的特征，因此可初步推断该菌株属于节杆菌属。 50760
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毕业论文关键词：节杆菌属 木质素 分离鉴定 16SrDNA
Isolation and identification of a lignin degrading strain Arthrobacter CK
Abstract This thesis reported the isolation of a bacterial strain named CK that has the ability to use lignin as sole carbon for growth from the East China Sea sea water . The strain CK cells are G+, short rods, non flagellated.After 2 days of incubation on seawater medium, colonies grow cream yellowish, convex, smooth edges. On the basis of the results of PCR and phylogenetic analysis of 16SrDNA and EzTaxon Server database. Strain CK showed high similarity to Arthrobacter nicotianae of 99%. In addition, morphological, physiological and biochemical characteristics was studied, the results showed that the optimal temperature and pH of growth are 35°C and 7.5, the optimal NaCl concentration is 25 g/L. Therefore, we indentify strain CK is a species in Arthrobacter genus.
Key words: Arthrobacter lignin isolation and identification 16SrDNA
目录
摘要 .. I
Abstract II
目录 III
引言 . 1
1.材料与方法 ... 1
1.1 实验试剂与仪器 .. 1
1.2 样品来源与培养基 2
1.3 菌的分离培养 2
1.4 菌株的富集与纯化筛选 2
1.5 菌株鉴定 3
2，结果与分析 . 5
2.1 菌株形态结构特征 5
2.2 不同盐浓度，温度，PH条件下菌株生长情况 ... 6
2.3 菌株16SrDNA 序列分析以及（G+C）值的测定 7
2.4 菌株系统发育树的制作 8
2.5 血清学试验 .. 10
3. 结论与研究展望 11
参考文献 12
致谢 ... 13
引言 烟草节杆菌属，G+，菌体形状为杆状或者球状， 经测定一般情况下菌种大小为 0.7～1.3μm×2.0～7.8μm。生长过程中，杆状菌体可断裂成小球状，其直径一般0.5～ 1.0μm 的范围之间。在无机盐培养基上生长时,一般菌落呈圆形，表面光滑，隆起，边缘整齐，菌落为乳白色变成乳黄色、不透明的圆形凸起，培养36 h后菌落的直径为1.8 mm～3.1mm， 一般情况下该菌属最适生长温度为35℃，具有较宽的pH生长范围，最适pH为7.2。 木质素（lignin）是一种存在于植物中，结构较为复杂，由羟基或甲氧基渠道的苯丙烷单体经无序聚合成的三维复杂结构[1]。造纸工业作为我国国民产业，在国民收入中起着举足轻重的作用[2]。但是，随着产业的发展，也给环境带来了严重的污染，具不完全统计，造纸业所带来的废水污染占全国工业污水和 COD排水量的 16％～20％和 42％，而木质素及其降解物是 COD 污染物产生量的主要来源之一，因此控制木质素及其衍生物的量是控制造纸废水污染首要解决的问题。就目前一些控制造纸污染的措施，其中生物处理是一种既经济节约又符合环保理念的手段。因为对于微生物(包括真菌，细菌)而言既具有生长繁殖快，又具有对极端环境有较强的耐受性。因此，充分发掘能降解木质素的微生物资源具有较好的应用前景 [3]。在此前，有很多科研工作者做过寻找能降解木质素的微生物，具有代表意义的有 Perestelo[4]等以及 Merii[5]主要从事能降解木质素的单菌落的研究。从前人所分离的具有降解木质素的菌种来看，其中丝状菌占多数，而丝状菌中放线菌属的大部分菌种具有较强降解作用；而非丝状菌的降解能力不强[6]，但近几年来，能降解木质素的非丝状菌频繁被发现，并表现出较强的降解能力，其中以芽孢杆菌和不动杆菌为主[6]，而能降解木质素的节杆菌属则很少报道，本实验从东海海域取样，最后筛选出一株具有降解木质素的菌株，经鉴定该种属于节杆菌属，为生物处理造纸污染提供依据。