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摘要本研究中，我们从大豆cDNA中克隆了组蛋白H3的编码序列，构入Gateway系统的pENTR载体。之后，组蛋白的赖氨酸进行点突变K79、K36、K27、K18、K9、K14、K4位点引进提前终止密码（PTC）.然后，通过LR反应分别将这些H3-PTC转入表达载体pEarleyGate103中，以发根农杆菌k599介导毛根转化，获得大豆composite苗。然后将这些苗进行盐胁迫处理。结果表明：H3-PTC-4和PTC-27对高盐逆境中大豆苗的整株生物量积累有显著促进作用。相反地，H3-PTC-9和 PTC-18对高盐逆境中大豆苗的整株生物量积累起显著抑制作用。51479
Abstract In this study,we cloned the CDS of GmH3from the soybean cDNA library into pENTR. These pENTR-H3-CDSwas mutated into H3-PTC-4, H3-PTC-9, H3-PTC-14, H3-PTC-18, H3-PTC-27,H3-PTC-36 and H3-PTC-79. By LR reaction, these H3-PTC fragments were recombined into pEarleyGate103, respectively. Then, these constructs weretransferred into soybean roots by Agrobacterium k599, respectively. The soybean composites treated with salt stress. Results showed that, H3-PTC-4 and PTC-27 enhanced the soybean’s salt tolerance, while H3-PTC-4 and PTC-27reduced the soybean’s salt tolerance.
毕业论文关键词：盐胁迫；大豆；组蛋白H3；提前终止密码
Keyword: Salinity stress; Soybean; Histone H3; Premature termination codon
目录
摘要 3
引言 5
1.材料与方法 7
1.1. 材料 7
1.2. 试验方法 7
1.2.1 大豆组蛋白H3基因的克隆 7
1.2.2 pENTR-GmH3-PTC定点突变载体的构建 9
1.2.3 构建大豆超表达载体pEarleyGate103-GmH3, pEarleyGate103-GmH3-4，pEarleyGate103-GmH3-9, pEarleyGate103-GmH3-14,pEarleyGate103-GmH3-18, pEarleyGate103-GmH3-23,pEarleyGate103-GmH3-27,pEarleyGate103-GmH3-36, pEarleyGate103-GmH3-79 10
1.2.4 大豆种子的预处理 10
1.2.5 发根农杆菌K599的培养与大豆侵染 10
2. 实验结果与分析 11
3. 结论 12
参考文献 13
致谢 15
引言
大豆是重要的粮食和饲料作物,是我国及其它亚洲国家人们主要的膳食蛋白质来源，它富含油脂和蛋白质,还可作为生物柴油的原料[1]。在这经济全球化的国际大背景之下，中国的大豆产业全面萎缩，自给形式严峻。然而我国大豆种植面临窘境，我国大豆种植区域虽然分布广，但是其不同程度上存在着土壤污染的严重问题，其中盐毒害最为严重。据农业机构分析，耐盐碱大豆品种的培育和沿海滩涂的开发可以有机结合起来[3]。
从国家粮食安全战略视角出发，研究大豆耐盐生长的适应性，充分利用有限的耕地资源[4, 5]。大豆生产每年都受到不同程度的盐胁迫的危害,若能利用基因工程技术对大豆品种进行遗传改良,培育耐盐大豆品种,在沿海滩涂上进行种植,不仅可提高我国大豆总产量,同时也为合理利用、开发沿海滩涂地,改良盐碱土壤做贡献。因此,进一步探究大豆耐盐机理显得尤为重要。
高盐环境中，植物体内的各种基本的生理活动均会遭受威胁[6]。一般而言，盐离子对植物的直接破坏作用主要通过渗透胁迫和离子毒害来实现，这两种危害会导致氧化胁迫等次级危害[7]。在长期的进化过程中，植物体内形成了一套完整的抗氧化系统用以抵御上述盐胁迫危害[8]。研究表明，大豆幼苗在高盐逆境中会显著提升POD和SOD的表达量和活性[9]。另外研究得知，耐敏感型大麦的根系比耐盐大麦品种的活性氧清楚力弱。类似地，水稻盐敏感品种也会比耐盐品种中抗坏血酸过氧化物含量低[10]。这些结果表明，抗逆性强的植物品种一般会在离子清除能力和渗透调节能力方面有明显的优势[11],从而保障这些植物具备更强的的生存和适应能力。