- 上一篇：超声-微波协同萃取火棘果多糖工艺研究
- 下一篇：莲蓬壳总黄酮提取条件的研究
采样地点：淮安市丁集镇。
采集黄瓜根围土、根内、根表、茎表、茎内、叶围和叶内分离细菌。
2.2.1 细菌分离方法：
取3 g样品，放入灭菌的三角瓶中，加27 ml无菌的0.85% NaCl，灭菌玻璃珠3 g，于摇床上120-150 rmp振荡30 min后，静置5 min，得到10-1稀释液，吸取100 μl加入到900 μl 的无菌0.85% NaCl中，混匀即为10-2样品稀释液，依次类推，制备10-3、10-4、10-5、10-6 稀释液。分别取10-4、10-5、10-6三个梯度的稀释液吸100 μl 涂布在R2A培养基上（R2A培养基（1 L）：酵母粉0.5 g，酪蛋白胨0.25 g，肉蛋白胨0.25 g，水解酪蛋白0.5 g，葡萄糖0.5 g，淀粉0.5 g，丙酮酸钠0.3 g，磷酸氢二钾0.3 g，水合硫酸镁0.024 g，琼脂15 g，pH=7.2），每个梯度3个重复，30°C培养48 h。
选菌落数在30-300个的平板，计数，挑取平板上所有的单个菌落分离、纯化，40%甘油保存于-70°C超低温冰箱中，备用。
2.2.2 内生细菌的分离
分别取样品若干，用1%的次氯酸钠浸泡5 min，70%酒精浸泡1-2 min，无菌水清洗3次（取最后一次清洗的溶液100 μl涂于R2A平板上培养，若48 h后无菌生长则认为表面消毒干净，无菌）。取3 g消毒好的样品置于菌研钵中，加入27 ml无菌的0.85% NaCl，浸软组织，研磨，用无菌的0.85% NaCl梯度稀释。取10-1、10-2、10-3三个梯度的稀释液各100 μl涂于R2A上，每个梯度3个重复，30°C培养48 h。
选菌落数在30-300个的平板，计数，挑取平板上所有的单个菌落分离、纯化，40%甘油保存于-70°C超低温冰箱中，备用。