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摘 要：利用一步法制备大肠杆菌BL21菌株感受态，选用pUC19质粒进行转化实验，分别讨论转化过程中不同的冰水混合物中放置的时间，室温中放置的时间，复苏时间以及摇床转速对感受态转化率的影响，结果表明，在冰水混合物中放置30min，然后室温放置10分钟，在150转37度摇床上复苏60min。最后培养的菌落数最多。56796
毕业论文关键词：大肠杆菌BL21，感受态，质粒提取，转化
Abstract：The competent cells of E.coliBL21 strain were prepared by TSB, choose pUC19 plasmid transformation experiments, and the variation of transformation rate for different time is placed in ice water and at room temperature, the recovery time and the speed of Shaking table. Experimental results showed that 30 min is placed in ice water, and then placed at room temperature for 10 min. in 150 turn, 37 degrees shaking bed recovery 60 min. Finally, cultivate the colony count most.
keywords: E.coli BL21, competence, plasmid extraction, transformation
目 录
前言 1
1 材料与方法 1
1.1 供试菌株和质粒 1
1.2 主要试剂与培养基配方 1
1.3 方法与步骤 1
1.4 转化过程中不同冰浴时间对转化效率的影响 1
1.5 转化过程中不同室温放置时间对转化效率的影响 1
1.6 转化过程中不同复苏时间对转化效率的影响 1
1.7 复苏时摇床不同的转速对转化效率的影响 1
2 结果与分析 1
2.1 不同冰浴时间对转化效率的影响 1
2.2 不同室温放置时间对转化效率的影响 1
2.3 不同复苏时间对转化效率的影响 1
2.4 不同转速对转化效率的影响 1
结 论 1
参考文献 1
致 谢 1
前言
感受态细胞是指细菌细胞在一定的生长阶段，自身或通过人为处理而具有摄取外源DNA并使其基因型和表型发生相应变化的能力，分为自然感受态和人工感受态。转化是指同源或异源的“裸露”DNA分子被感受态细胞摄取并得到表达的水平基因转移过程。基因转化大肠杆菌是基因研究中最常用的技术。如载体构建,DNA片段测序，都需要大量制备和使用大肠杆菌感受态细胞[1]。制备大肠杆菌感受态最常用的方法是CaCl2法[2]。在CaCl2处理和制备大肠杆菌感受态细胞的过程中，Ca2+是感受态建立和转化的必要条件[3]。Ca2+的作用就是与细菌细胞膜上的多聚无机磷酸和多聚羟基丁酸化合物形成复合物。并破坏细菌细胞膜上的脂质阵列。从而方便外源DNA的摄入[4-5]。CaCl2转化法虽然重复性好、效率高，但操作起来较为繁琐，需要多次离心洗涤细胞、CaCl2长时间处理受体细胞，并且在转化过程中需要1-2d时间[6]。
与CaCl2法相比较，一步制备法的优点是，操作方便，只加一种试剂即可，且不需要另加保护剂就可直接冻存，更快捷稳定，转化时，该法也更方便，此法转化时不需要热激。但一步法对实验操作要求所用器具一定要清洁，制备感受态细胞时所有操作尽量保证在冰上操作，该方法的转化效率也相对较低，适用于对转化率要求不高的实验。