3,5-二硝基水杨酸(DNS)购于国药集团化学试剂有限公司,化学纯CP
硫酸镁、氯化钙、硫酸亚铁:无锡市亚威化工有限公司,分析纯AR
磷酸二氢钾、氯化钴:中国医药(集团)上海化学试剂公司,分析纯AR
硫酸锰:上海试剂二厂,化学纯CP
氢氧化钠:南京化学试剂有限公司,分析纯AR
2.2 方法源`自,751`.论"文|网[www.751com.cn
2.2.1 血球计数板法定量接种Rut C-30到种子培养基
在无菌操作台中用涂布棒将平板里的里氏木霉刮出来,加入1ml无菌水,然后稀释100倍,使孢子浓度为107/ml,装入试管中,按5%的接种量接种到种子培养基,置于30℃摇床培养3d,放入冰箱冷藏,接种时取用。
2.2.2 纤维素酶活力测定方法
滤纸酶活( FPase activity简称 FPA)为测定指标,酶活力测定采用3,5二硝基水杨酸显色法[18]。
用13*100mm的试管,给每个试管做好标记,将待测酶液稀释到合适的浓度。
向每只试管中加入稀释过的酶液0.25ml,加1.25mlpH4.8,0.05mol的柠檬酸缓冲溶液,混匀。将滤纸放入试管,由于“弹簧作用”滤纸被卡在试管口,酶液空白不加滤纸条。将整个试管放入50℃水浴锅中预热2-3min,用玻璃棒将试管口的滤纸条逐个戳到试管底部,充分浸浴在液体下。同时开始计时1h。大约45min时准备沸水浴。1h后快速逐个加入3mlDNS试剂,顺序与滤纸条戳下顺序一致,混匀。将以上试管沸水浴5min,快速冷却。取200μl反应液加2.5ml蒸馏水混匀,以底物空白为空白在540nm下测定比色值A540。