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本论文以温莪术内生真菌EZG0807为出发菌株,利用超导磁体模拟空间微重力、高磁场环境对其进行诱变,采用AFLP分子标记法对诱变菌株基因组进行标记,初步探索诱变机理,为后续高产菌株的筛选奠定基础。
2 实验材料
2.1 实验材料
温莪术内生真菌EZG0807及其突变菌株M7212
2.2 培养基
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基:马铃薯 200g,葡萄糖 20g,琼脂 20g,水 1000ml。
2.3 溶液配制
(1)TBE贮存液(10×):108g Tris,55g硼酸,40mL0.5mol/L EDTA,加去离子水至1L,pH8.0。
(2)工作液(1×):89mmol/L Tris碱,89mmol/L硼酸,2mmol/L EDTA
(3)氯仿:异戊醇(24:1):氯仿240mL,异戊醇10mL(可现用现配)。
(4)TE缓冲液 :(10×,PH8.0) 100mmol/L的Tris-Hcl(PH值8.0)和10mmol/L的EDTA(PH值8.0)混合分装后高压灭菌,室温保存。
(5)CTAB提取液(1000ml):2g CTAB,10ml Tris-HCL(1M PH8.0) 10ml EDTA(0.5M PH8.0),8.2g NaCl,74.4ml ddH2O,0.5gPVP(聚乙烯吡咯烷酮)。
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