关于染色体组型分析的报道和文章十分多,鱼类方面,王金娜等采用PHA和秋水仙素体内注射法直接制作肾细胞染色体标本,对草海鲫鱼的染色体进行了核型分析,得到草海鲫鱼的核型公式为3n=33m+24sm+33st+60t[2] ;李岑等采用植物血球凝集素和秋水仙素活体注射法,取泰国斗鱼的肾和腮分别制备雌、雄染色体滴片,分析得泰国斗鱼的染色体组型公式为2sm+8st+32t[3] 。昆虫方面,王庆恒等采用注射秋水仙素,低渗,固定制片的方法对裸体方格星虫的染色体进行组型分析,得到了裸体方格星虫的染色体组型为2n=2x=26m+8sm,未发现性染色体和随体[4]。可以发现,制备染色体大多数都是通过体内注射秋水仙素,低渗,固定,制片的方法来完成。文献综述
目前,国内对于虾类的染色体研究报道是比较少的。孔凡骏对斑节对虾的染色体研究,发现斑节对虾精原细胞染色体数出现频率最高的为88,因此得出了斑节对虾的染色体数目为2n=88,n=44[5] ,但并未对各种类型的染色体进行分类和计数,没有进一步的研究和探讨。李洋等对脊尾白虾染色体的研究中发现,脊尾白虾的染色体数目为90的出现频率最高,因此确定了脊尾白虾二倍体的数目为90,2n=90,对中期分裂相染色体臂长进行测量与分析发现,中部着丝粒染色体(m)有56条,亚中部着丝粒染色体(sm)有8条,亚端部着丝粒染色体(st)有12条,端部着丝粒染色体(t)有14条,核型组成公式为2n=56m+8sm+12st+14t,他们并没有发现异性性染色体的存在[6]。
本文参照各种染色体组型研究的报道和文献,采用注射秋水仙素,低渗,固定,空气干燥法以及吉姆萨染色法对青虾进行染色体组型分析以及讨论,旨在为青虾的遗传育种、人工养殖提供参考资料。
2 材料、试剂、仪器与方法
2.1 材料
2.1.1 青虾
实验所用的青虾是采购与淮安市淮海市场的水产摊位,共采购80尾,挑选出大小基本相同的10尾雄虾,10尾雌虾。采购回的青虾放置于实验室的22℃水箱中,通入氧气,每天喂养一次,每2天换一次水。实验过程中,取虾的肝胰腺、腮、肌肉为实验材料。来~自^751论+文.网www.751com.cn/
2.1.2 试剂
0.02%秋水仙素水溶液
0.070mol/L、0.075mol/L、0.080mol/L氯化钾低渗液
卡诺氏固定液
吉姆萨原液
PH7.2磷酸盐缓冲液
2.1.3 试剂配制
0.02%秋水仙素水溶液:10mg的秋水仙碱和180mg的氯化钠溶于20ml的蒸馏水中(避光保存)
0.070mol/L氯化钾低渗液:0.521g KCL溶于100ml蒸馏水中(现配现用)
0.075mol/L氯化钾低渗液:0.559g KCL溶于100ml蒸馏水中(现配现用)
0.080mol/L氯化钾低渗液:0.596g KCL溶于100ml蒸馏水中(现配现用)
卡诺氏固定液:甲醇和冰乙酸按体积3:1 配制,甲醇和冰乙酸按体积1:1配制(现配现用)
吉姆萨使用液:吉姆萨原液和磷酸盐缓冲液按体积1:9 配制(棕色瓶保存)