水稻外源基因NPTⅡ的定性及定量检测分析

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摘要：转基因植物中外源基因拷贝数是影响目的基因表达水平和遗传稳定性的重要因素，本文以水稻为研究材料，分别使用定性和定量PCR进行分析检测。判断水稻样品中是否含有目标基因NPTⅡ。66657

毕业论文关键词：水稻外源基因 PCR技术

Abstract: Transgenic plants gene copy number is influence gene expression level and genetic stability factors, this paper used rice as research materials, respectively using qualitative and quantitative PCR analysis and detection. To determine whether the rice sample contained target gene NPT II.

Keywords: rice foreign gene PCR

1前言 4

2 材料与方法 4

2.1 材料 4

2.2 试剂与耗材 5

2.3 仪器设备 5

2.4 方法 5

2.4.1 DNA的提取与纯化 5

2.4.2引物序列 6

2.4.3 PCR检测 6

3结果分析 7

3.1 定性PCR检测 7

3.2荧光定量PCR检测 8

结论 10

参考文献 11

致谢 12

1前言

随着基因工程技术的迅速发展，转基因技术也日趋成熟，商品化生产的转基因生物产品也就越来越多。目前，种植的转基因作物主要是玉米、棉花、水稻和大豆等，水稻是世界上主要的粮食作物之一[1]，近年来世界范围内出现了严重的粮食危机。杂交水稻增产有限，而转基因水稻可以大幅度提高水稻产量。

然而用于创造转基因植物的技术并不准确，在转基因操作过程当中，多个拷贝的外源基因或基因片断会随机地插入作物原有的基因当中，造成原有基因的缺失或重排。转入基因的表达产物是否有毒性或致敏性，也对转基因食品的安全造成很大影响。论文网

目前，转基因生物检测技术主要分为两大类，一类是基于蛋白质检测的蛋白检测技术，另一类是基于核酸检测的检测技术[2]。由于DNA的稳定性，基于核酸的检测技术几乎适合所有种类的样品。

PCR是聚合酶链反应(Polymerase chain reaction)的简称。是利用核酸复制酶、引物和核酸单体组成元件，在试管内完成模板DNA的复制。PCR技术有特异性强、灵敏度高、快速、准确、重复性好等优点[3]。转基因产品定性PCR检测方法可以判断待检样品中是否含有外源基因。

随着分子生物学技术的发展，近年来逐渐发展的实时荧光定量PCR 技术，不仅提高了检测的准确性和灵敏度，而且该方法对PCR 产物不需要进行后期处理，这大大减少了交叉污染的形成，克服了普通PCR存在假阳性以及不能进行精确定量的缺点，同时也提高了检测速度[4]。

NPTⅡ是植物遗传转化中最常用的筛选标记基因之一，来自大肠杆菌转座子Tn5上的APHⅡ基因，编码新霉素磷酸转移酶。NPTⅡ可使ATP分子上的γ磷酸基转移到抗生素分子上，从而影响抗生素与核糖体亚基的结合，使氨基糖苷类抗生素(如G418、卡那霉素、巴龙霉素和新霉素等)因磷酸化而失活[5,6]。本研究主要以水稻为材料，分别采取定性及定量PCR技术，对待测样品进行检测分析。文献综述