土壤作为生态系统中物质循环和能量转化过程的重要场所,其养分变化及成分构成受所种植的作物影响较大。
土壤酶是生物在土壤中活动累积的具有化学催化活性的物质,其活性的变化可反映化土壤学性质和生物学的潜在指标,也可反映土壤生态系统中土壤微生物的活性、养分循环状况及土壤肥力变化[1]。
土壤转化酶(蔗糖酶)对土壤中的碳循环有重要作用。它与土壤有机质,氮、磷含量,微生物数量及土壤呼吸强度相关[2]。酶促作用产物——葡萄糖。葡萄糖是植物、微生物的营养来源。在一般情况下,土壤肥力越高,转化酶活性越强。因此土壤转化酶可以做为评价土壤熟化程度和土壤肥力水平的一个指标[3]。
1.1 土样区域概况
淮阴区地处淮河下游、苏中大平原北部腹地,无山多水。其中耕地65010公顷,从而第一产业发达。由于农业的生产的需求,所以其土壤中有机物质和矿物质丰富。满足实验所需的两种必要条件。一:种类丰富的作物以及栽培方式。二:较好的土质。
2 材料与方法
2.1 试剂及相关溶液
3,5二硝基水杨酸溶液:称取0.2g二硝基水杨酸,溶于8ml2N氢氧化钠和20ml水中,加12g的酒石酸钾钠,用水稀释至40ml
pH5.5磷酸缓冲溶液:1/15磷酸氢二钠1ml加1/15磷酸氢二钾19ml即可
8%蔗糖缓冲溶液:8.7g蔗糖溶于100ml水中文献综述
甲苯
标准葡萄糖溶液:将葡萄糖先在50-58℃条件下,真空干燥至恒重。然后称取500mg于苯甲酸溶液中(5mg还原糖/ml),即成标准葡萄糖溶液。
三角瓶, 50ml容量瓶,水浴锅,分光光度计等。
2.2 土壤样品的采集与处理
用12个塑料袋在淮阴区采集6种作物(玉米,小麦,大蒜,油菜花,蚕豆,菠菜)的土样。每个作物分别取2层土,一层为作物表面处。一层为作物根部处。带回实验室。
将取回的土样在避免阳光直射的情况下,晾晒3-5天。然后将其相对碾碎,去除大颗粒杂物,再用60目和20目的木筛子精筛选。将筛好的土样放入事先准备好的三角瓶中密封保存。
2.3 土壤含水量测定
取一部分土样在电子天平上测量重量,记录数值,然后放入烘箱中烘至衡重。测出每个样品土壤中的含水量,以此来确定实验用土的含水量,减小误差。
2.4 pH值的测定
将上述烘干的一部分样品,称过1mm筛风干土样1g于50ml高型小烧杯中,加入25ml无水二氧化碳或1M KCl溶液,搅动2分钟,使土体充分散开,放置半小时,用pH计测定。将电极球部插入土壤悬液中轻轻转动,待电极电位达到平衡,按下读数开关,测读pH值。每测一个样液,用水冲洗电极球部,并用滤纸轻轻吸干水分,再进行第二个样液测定。测5到6个样品,用pH缓冲液校正一次。
2.5 土壤转化酶活性测定
本论文采用3,5-二硝基水杨酸比色法测定土壤转化酶活性,具体操作如下:称取1g土壤,置于50mL三角瓶中,注入3ml 8%蔗糖溶液,1ml pH5.5磷酸缓冲液和1滴甲苯。摇匀混合物后,放入恒温箱,在37℃下培养24h。到时取出,迅速过滤。从中吸取滤液0.2ml,注入50ml容量瓶中,加0.6ml 3,5二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min,随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色,最后用蒸馏水稀释至50ml,并在分光光度计上于508nm处进行比色[4]。来!自~751论-文|网www.751com.cn
标准曲线绘制:取1ml不同浓度的葡萄糖工作液,按照测定蔗糖酶活性的方法进行显色,比色后以光密度值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。