(2) 梯度稀释:取8个离心管,用记号笔分别标上1-8号。分别在1-8号中的离心管放入90uL的蒸馏水,利用移液枪向充分混匀的锥形瓶中吸取10uL的悬浊液放入1号管中,再从1号管中取出10uL放入2号管中,以此类推,形成10-1 、10-2 、10-3 ..... 10-8 浓度的菌液。
(3) 浇培养基:在超净台中取出4个已灭菌的培养皿,并用记号笔标上1-4号。向培养皿中倒入充分融化的LB培养基,并立即放平,待凝。
(4) 涂布平板:利用移液枪向10-2 、10-4、 10-6、10-8 浓度的离心管中吸取少量菌液,将菌液滴入LB培养皿中。将涂布玻棒在酒精灯上充分灼烧,冷却。涂布玻棒冷却过后,将悬浊液轻轻涂开、均匀铺满整个平板,并防止平板培养基破损。
(5) 平板培养:将平板倒置放入30︒C 恒温箱中培养24h左右。
(6) 挑单菌落:取出24h后培养的平板,取出菌落生长较好的培养皿,根据菌落的形态,颜色,大小的不同,标出平板中菌落N个。
(7) 划线接种:在超净台中取出N个已灭菌的培养皿,向培养皿中倒入充分融化的LB培养基,并立即放平,待凝。并用记号笔在平板上分别标记1-N。用接种环将菌落分别接到平板上,将平板倒置放入30︒C 恒温箱中培养至形成单一的菌落,并观察菌落的形态。
(8) 液体培养菌种:取N个装有10mL液体 LB培养基的试管,分别标上1-N 号标记,在超净台中用枪头分别将1-N号培养皿中的菌种接入1-N号液体 LB培养基试管中。放入摇床中培养至液体浑浊。来`自^751论*文-网www.751com.cn
(9) 菌种的保存:准备N*2个离心管,在离心管上分2组标记上1-N记号,在第一组中每管用移液枪吸入700uL的甘油,再分别从1-N中的LB培养液的试管中吸取700uL的菌液放入第一组1-N离心管中,在第二组中每管用移液枪吸入1400uL的菌液。将第一组的离心管放入零下72︒C的冰箱内。将第二组的离心管放入零下20︒C的冰箱内。
2.3 实验结果
在本实验挑到16种菌[4],培养了16种菌,并分别得到了16种菌的形态,并对其经行了拍照,保存了16种菌。
2.4 菌种形态图
从河沟底泥土壤中分离划线培养得到的菌株。如图2-4所示,16种菌株中一种,命名为GN-1,该菌在LB培养基上生长12d后,菌落呈淡黄色,圆形,直径约为3 mm,表面凸起,光滑,边缘整齐。