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摘要： 制备自组装HA/RHB/DNA三元复合物非病毒基因载体，并对其进行表征及细胞学评价。通过CBA（N,N'-双（丙稀酰）胱胺），MBA（N,N'-亚甲基双丙烯酰胺）及AEPZ（1-（2-氨乙基）哌嗪）合成带正电荷的RHB，与负电荷质粒DNA进行自组装形成二元复合物RHB/DNA纳米粒，进一步通过静电包衣技术对所制备的纳米粒进行修饰得到HA/RHB/DNA三元复合物，对所制备的三元复合物进行表征及细胞学评价。 本文所制备的HA/RHB/DNA三元复合物最优比为5:1:5。在此条件下，细胞转染效率最高，毒性最低，并在体内可以稳定存在。 本文制备的HA/RHB/DNA三元复合物载体系统是一种安全，有效而且稳定的非病毒基因递送系统，为合理设计载体系统提供了新的方法，也为进一步进行体内研究奠定了基础。20137
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关键词: N,N'-双（丙稀酰）胱胺；N,N'-亚甲基双丙烯酰胺；三元复合物；基因递送载体；转染效率
Prepare, characterization, cellular evaluation of self-assembled HA/RHB/DNA ternary complexes non-viral systerm for gene delivery
Abstract ： prepare self-assembled HA / RHB / DNA ternary complex non-viral gene vectors, and its characterization and cytological evaluation. CBA (N, N'-bis (acrylic acid) cystamine), MBA (N, N'-methylene-bis-acrylamide) and AEPZ (1 - (2 - aminoethyl) piperazine) with synthetic positive charge RHB, and negatively charged plasmid DNA self-assembly to form a binary complex RHB / DNA nanoparticles, the nanoparticles prepared further modified to obtain HA / RHB / DNA ternary complex by electrostatic coating technology, prepared ternary complex characterization and cytological evaluation. The results in this paper prepared HA / RHB / DNA ternary complex optimal ratio of 5:1:5. Under this condition, the highest transfection efficiency cells, low toxicity, and can be stable in vivo. prepared HA / RHB / DNA ternary complex vector system is a safe, effective and stable non-viral gene delivery systems for the rational design of a carrier system a new method, but also for further in vivo studies of the foundation.
Keywords:N,N'-(dithiodi-2,1-ethanediyl)bis(acrylamide); N,N'-Methylenebisacrylamide Termary complex; Gene delivery vector
目录
1 前言 1
1.1 研究背景 1
1.2 研究基础 1
1.3研究意义 1
2文献综述 2
2.1 基因药物载体材料介绍 2
2.1.1 脂质体作为基因载体 2
2.1.2阳离子作为基因载体 2
2.1.3 聚合物作为基因载体 3
2.2 靶向受体结合的基因药物载体 4
2.2.1 以多肽作为药物传递系统的靶头 4
2.2.2 以天然高分子HA作为靶头 6
2.3 静电包衣的应用 7
3 实验内容 7
3.1 仪器和试药 7
3.1.1仪器 7
3.1.2试药 8
3.2自组装HA/RHB/DNA三元复合物的制备与表征 9
3.2.1 RHB的制备 9
3.2.2 RHB/DNA二元复合物的制备 12
3.2.3 HA/RHB/DNA 三元复合物的制备 13
3.2.4质粒的抽提 15
3.3 自组装HA/RHB/DNA三元复合物细胞学评价 15
3.3.1 RHB细胞毒性试验 15
3.3.2 RHB/DNA的压缩性试验 16
3.3.3还原剂DTT对RHB/DNA二元复合物稳定性影响 17
3.3.4 RHB/DNA二元复合物细胞毒性试验 17
3.3.5 RHB/DNA二元复合物细胞转染效率评价 18
3.3.6 红细胞凝集试验 20