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摘要：选择市售的三种细胞裂解液（RNAiso Plus、TRNzol Plus和RNAOUT）和两种DNA/RNA共提试剂盒（柱式病毒RNA-DNA双提试剂盒、QeasyTM快速DNA/RNA共提试剂盒），分别提取猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV, JXA1-R）、猪瘟病毒（CSFV, HCLV）和乙型脑炎病毒（JEV, SA-14-14-2）三种病毒的RNA，通过琼脂糖凝胶电泳和Real-time PCR间接评价了所提取的RNA的质量。结果表明：对于琼脂糖凝胶电泳，上述三种细胞裂解液和QeasyTM快速DNA/RNA共提试剂盒对应的样本均可见清晰高亮的条带，可用于临床RNA病毒检测以及定性分析。对于Real-time PCR，QeasyTM快速DNA/RNA共提试剂盒组RNA相对水平最高，RNAiso Plus和TRNzol Plus两种细胞裂解液组其次，以上三种试剂可用于临床RNA病毒检测以及定量分析。28048
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毕业论文关键词：RNA；提取方法；比较；临床样本
Comparison of several methods for extracting RNA from animal tissues by several commercialization kits
Abstract：Three commercially available cell lysates (RNAiso Plus, TRNzol Plus and RNAOUT) and two DNA / RNA co-kits (LC-DNA double-kit, QeasyTM rapid DNA / RNA co-kit) were selected to extract three animal RNA viruses（PRRSV, CSFV and JEV）. The RNA quality was evaluated indirectly by agarose gel electrophoresis and Real-time PCR. The result shows, for agarose gel electrophoresis, the clearly and highlight bands can be seen above the groups of the three cell lysates and QeasyTM rapid DNA / RNA co-kit, which can be used for clinical RNA virus detection and qualitative analysis. For Real-time PCR, the RNA relative levels of the QeasyTM rapid DNA / RNA co-kit group is highest, and the two cell lysates groups(RNAiso Plus, TRNzol Plus) followed. The above three reagents can be used for clinical RNA virus detection and quantitative analysis.
Key words: RNA；Extraction Method；Comparison；Clinical samples
目 录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1试剂 2
1.2 总RNA提取 2
1.2.1 细胞裂解法提取RNA2
1.2.2 柱式病毒RNA-DNA双提试剂盒法提取RNA3
1.2.3 QeasyTM快速DNA/RNA共提试剂盒法提取RNA3
1.3 RNA质量检测3
1.3.1琼脂糖凝胶电泳检测 3
1.3.2 Real-time PCR 4
2 结果4
2.1琼脂糖凝胶电泳检测结果5
2.1.1高致病性猪繁殖于呼吸综合症活疫苗检测结果5
2.1.2猪瘟耐热保护剂活疫苗检测结果 5
2.1.3日本乙型脑炎弱毒活疫苗检测结果 6
2.2 Real-time PCR检测结果6
2.2.1高致病性猪繁殖于呼吸综合症活疫苗检测结果6
2.2.2猪瘟耐热保护剂活疫苗检测结果 7
2.2.3日本乙型脑炎弱毒活疫苗检测结果 7
3 讨论 8
致谢9
参考文献9
几种商品化试剂盒对动物组织RNA提取方法的比较
RNA是生物体重要的遗传物质[1]。近年来，越来越多的科研结果表明，RNA在生命进程中的作用远不止于此，在2002年度Science评选的10大科学成就中 RNA名列榜首。
RNA分子提取是生物学研究中的一项基本内容，是进行基因表达分析的基础[2]。对于cDNA文库构建、荧光定量PCR、RT-PCR、Northern杂交等下游分子生物学实验来说，都需要质量好的，完整性高的RNA[3]。
在所有RNA试验中最关键的因素是分离得到全长RNA。分离出纯度高且完整的RNA是进行基因表达分析及RNA结构功能研究的基础。在所有RNA实验中，最关键的步骤是分离得到纯度高且完整的RNA。从组织细胞中分离纯粹完整的RNA对于分子克隆和基因表达分析等试验是至关重要的[4,5]
Chomczyski和Sacchi第一次提出了用异硫氰酸胍法提取细胞内的RNA[6]，使得RNA的提取过程变得简便快捷。常见的RNA 提取方法有强变性剂法[7]、CTAB 法[8]、SDS-Phenol 法[9]以及热硼酸法[10]等。在商品化的今天，国内外生物试剂公司研发出了许多RNA提取试剂盒。比如Takara 公司的 RNAiso Plus； Invitrogen 公司的 Trizol 总RNA提取试剂盒以及 PureLink™ RNA Mini Kit；上海生工的 UNlQ-10 柱式Trizol总 RNA 抽提试剂盒；Omega 公司的RNA小量提取试剂盒（Bacteria RNA kit）以及高纯 RNA 抽提试剂盒（HP total RNA kit）；Qiagen 公司的 RNeasy Protect Bacteria Mini and Midi Kits等。都可以从病料组织或者培养细胞中快速有效地提取出高质量高纯度的RNA。