1.2.2 液体培养播种 用1/2 MS液体培养基作为基本培养基,均添加30 g•L-1蔗糖。培养基在121℃下灭菌30 min。将采集的蒴果放入含有洗涤剂的烧杯中,摇晃洗涤15 min,再用流水冲洗30 min。在超净工作台上先用75%酒精消毒30 s,再用10%的次氯酸钠浸泡15 min,期间不停的摇动,使其消毒彻底,无菌水冲洗3-4次,放在无菌滤纸上吸干表面水分待用。在无菌条件下纵向剖开蒴果,用镊子夹取蒴果外壳,将种子轻轻抖落到液体培养基中。培养温度为25±1 ℃,光照强度2000~2500 lx,光照时间12 h•d-1。待液体培养基中的白及种子萌发后再播种于草炭土︰珍珠岩(1︰1)、蛭石、水苔、林下土等不同基质表面,之后每隔5 d浇洒一次水或改良Hoagland’s营养液。根据基质类型和管理方式分为,处理1(y1):播种于蛭石中,喷施水;处理2(y2):播种于草炭土︰珍珠岩(1︰1)中,喷施水;处理3(y3):播种于水苔中,喷施水;处理4(y4):播种于林下土中,喷施水;处理5(y5):播种于蛭石中,喷施改良Hoagland’s营养液;处理6(y6):播种于草炭土︰珍珠岩(1︰1)中,喷施改良Hoagland’s营养液;处理7(y7):播种于水苔中,喷施改良Hoagland’s营养液;处理8(y8):播种于林下土中,喷施改良Hoagland’s营养液。
1.2.3 营养液的配置 以改良Hoagland’s配方为营养液,以水为对照。改良Hoagland’s营养液配方:4H2O•Ca(NO3)2 945 mg•L-1、KNO3 506 mg•L-1、NH4NO3 80 mg•L-1、KH2 PO4 136 mg•L-1、MgSO4 493 mg•L-1、铁盐溶液2.5 ml•L-1、微量元素液5 ml•L-1 pH6。铁盐溶液:7H2O•FeSO4 2.78 g、EDTA-2Na 3.73 g 、H2O 500 ml、pH5.5。微量元素液:KI 0.83 mg•L-1、H3BO3 6.2 mg•L-1、MnSO4 22.3 mg•L-1、ZnSO4 8.6 mg•L-1 、Na2MoMO4 0.25 mg•L-1、CuSO4 0.025 mg•L-1、AlCl3 0.025 mg•L-1
1.2.4 多菌灵和GA对白及幼苗的影响 以白及种子直接播种和液体培养播种,考察多菌灵(FUNGICIDE公司生产)、GA(KAYON公司生产)对白及萌发生长的影响。生长条件为:培养温度25±1 ℃,光照强度2000~2500 lx,光照时间12 h•d-1的温室大棚内;每隔5 d浇洒一次生物添加剂。根据直接播种和液体培养播种筛选出的结果,将白及种子和液体培养基培养过的白及播种于草炭土︰珍珠岩(1︰1)中,之后根据不同的培养条件和管理方式分为,处理1:直接播种,喷施水;处理2:直接播种,喷施水和多菌灵;处理3:直接播种,水苔,喷施水和GA;处理4:直接播种,喷施改良Hoagland’s营养液和水;处理5:直接播种,喷施改良Hoagland’s营养液和多菌灵;处理6:直接播种,喷施改良Hoagland’s营养液和GA;处理7:液体培养基萌发后播种,再喷施水;处理8:液体培养基萌发后播种,再喷施多菌灵和水;处理9:液体培养基萌发后播种,再喷施GA和水;处理10:液体培养基萌发后播种,再喷施改良Hoagland’s营养液和水;处理11:液体培养基萌发后播种,再喷施改良Hoagland’s营养液和多菌灵;处理12:液体培养基萌发后播种,再喷施改良Hoagland’s营养液和GA。
1.3 数据分析 用Excel统计白及的发芽率或成苗率,白及幼苗的株高、叶宽、叶长;用SPSS统计分析软件处理,进行多重比较。制作表格对多重比较结果进行整理。
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