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摘要：为了了解鸽圆环病毒在赛鸽的感染率，及其cap基因的序列分析，本研究采用PCR方法对江苏某鸽棚采集的104份病鸽组织样品进行了鸽圆环病毒的检测，阳性率为49％，说明PiCV的感染比较严重。在51份被检出的阳性样品中，随机选取了11份阳性样品进行cap基因的扩增、纯化，并将产物克隆至pMD18-T载体测序,并与已知参考毒株做序列比对及系统发育分析。结果显示，鸽棚11份阳性样品的cap基因核苷酸序列同源性为80.5%～100%。在与国内已发布的9株PiCV参考毒株进行系统发育分析显示，11份阳性样品可划分为4个进化分枝（1.1.1.1、1.1.1.2、1.2.2.1、1.2.2.2），其中ZJ03单独为一个分枝（1.2.2.1）。33187
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毕业论文关键词：鸽圆环病毒；cap基因；基因序列
Epidemiologic investigation of pigeon circovirus and analysis of gene sequence of cap gene of PiCV
Abstract： In order to understand the pigeon circovirus infection rate in racing pigeon, and analyze the sequence of cap gene, our study detected the 104 tissue samples from Jiangsu racing pigeon dovecote by PCR .The positive rate was 49%, indicating that PiCV infection is more serious. 11 positive samples were randomly selected from the total 51 positive samples, and were amplified, purified and cloned into pMD18-T vector for sequencing respectively and alignment and phylogenetic analysis were done with sequences from known reference strains. The results showed that the nucleotide sequence of cap gene between the 11 positive samples shared 80.5% to 100%. Phylogenetic analysis with 9 known reference strains showed that 11 positive samples can be pided into 4 clades (1.1.1.1, 1.1.1.2, 1.2.2.1, 1.2.2.2), and ZJ03 is a single clade(1.2.2.1).
Key words: pigeon circovirus ;cap gene;gene sequence
目 录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法 2
1.1材料 2
1.1.1病料2
1.1.2质粒与菌种2
1.1.3主要试剂2
1.2方法 3
1.2.1设计与合成引物3
1.2.2病料核酸的提取3
1.2.3 PCR检测3
1.2.4 cap基因的扩增纯化3
1.2.5重组质粒的构建与鉴定3
1.2.6质粒提取与序列分析3
2 结果4
2.1 PCR检测4
2．2 cap基因的扩增、纯化4
2.3 cap基因的序列比对及同源性分析5
2.4 cap基因的系统发育分析6
3 讨论7
致谢8
参考文献9
图1 5
图2 5
图36
表1 4
表2 6
鸽圆环病毒的流行病学调查及其cap基因的序列分析
圆环病毒科（Circiviridae）的成员包括猪、禽及植物的圆环病毒，是目前以知的最小的动植物病毒，是国际病毒分类委员会（ICTV）第751次学术报高会上新增的一科［1］。圆环病毒的病毒颗粒没有囊膜，是呈二十面体对称的球形，直径为17nm～22nm，基因组为单分子单股DNA，大小为1.7kb～2.3kb ，病毒颗粒常可见于感染细胞，以珍珠串样排列［2］。圆环病毒学科包括了圆圈病毒属（Cyrovirus）和圆环病毒属 （Circirus）两个属。圆圈病毒属的唯一成员是鸡贫血病毒（anemiavirus，CAV）［3］，圆环病毒属的成员有猪圆环病毒(Porcine circoviruses, PCV1 PCV2)I 型和II 型、鹦鹉喙羽病毒(Psittacine beak and feather disease virus, BFDV)、鸽圆环病毒(Pigeon circovirus, PiCV)等［4］，以及最近在鹅、鸭、渡鸦、金丝雀、八哥、鸥及天鹅等动物也发现了圆环病毒感染［5］。
圆环病毒主要感染2月龄至一年以内的青年鸽，刚出壳的雏鸽因为有母源抗体的保护不会发生本病，本病的潜伏期一般为 8～14天，发病1～2周内病鸽相继死亡,发病3～4 周出现死亡高峰［6］。病鸽主要表现为精神萎靡、嗜睡、食欲下降、缩颈、腹泻及呼吸困难，而非典型性的病例临床特征为羽毛营养不良或脱落以及喙的变形，鸽圆环病毒以损害鸽的胸腺和法氏囊为主，组织病理学变化为法氏囊的萎缩、坏死，胸腺变深褐色，骨髓再生不良等[7]。鸽圆环病毒的全基因组序列由Mankertz等人于2000年克隆并测定，结果显示PiCV全基因组的大小为2037bp，编码5个ORF(open reading frame)，其中ORF-V1编码复制相关结构蛋白(the replicated associated protein,Rep),ORF-C1编码核衣壳蛋白(the putative capsid protein，Cap)，其余3个编码未知的蛋白质[8]。1993年，鸽圆环病毒首次在美国加利福尼亚被报道，之后，加拿大、德国、意大利、英国、法国、比利时和澳大利亚也出现感染病例报道［9］。