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摘要：Mx蛋白是由I型和III型干扰素诱导宿主细胞产生的关键性抗病毒蛋白之一，属于发动蛋白超家族，具有很强的GTP酶活以及自装配倾向。Mx蛋白几乎存在于所有脊椎动物中，不同种属的Mx蛋白具有不同的抗病毒效应，尤其是有效抑制RNA病毒的复制。CSF是CSFV引发的一种烈性的，具有传染性的疾病，给全球养猪业带来严重的经济损失。本实验室已有实验证明猪Mx1蛋白可以抑制CSFV的增殖。本文通过Western blot、实时荧光定量PCR、病毒产量减少试验证明了牛Mx1蛋白对CSFV的增殖有抑制作用。34103
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毕业论文关键词： boMx1；猪瘟病毒；抗病毒
A preliminary study bovine Mx1 protein inhibits the proliferation of Classical Swine Fever Virus
Abstract: Mx proteins are one of the key antiviral proteins which induced by IFN I and IFN III in host cells. Mx proteins belong to dynamin-like large GTPases, which with strong GTPase activity and has tendency of self-assembly. Mx proteins exist nearly in all vertebrates, and have different antiviral effect in different species, especially for RNA virus. Classical swine fever is a deadly infectious disease caused by classical swine fever virus, which brings the global pig industry serious economic loss. Our laboratory had proved that the porcine Mx1 protein could inhibit the proliferation of CSFV. We made Western blot、Real-time fluorescent quantitative PCR、virus production reduce test, which had proved that the inhibitory effect of bovine Mx1 protein on the proliferation of Classical Swine Fever Virus.
Key words：boMx1；CSFV；Antiviral
目 录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言4
1.材料4
1.1细胞株与病毒4
1.2主要试剂4
1.2主要仪器4
2.实验方法 5
2.1有关试剂配制5
2.2质粒的构建 5
2.2.1引物的设计 5
2.2.2PCR扩增目的片段5
2.2.3目的基因片段与载体连接6
2.3去内毒素法小提质粒6
2．4 细胞培养 6
2．5 真核表达质粒瞬时转染 7
2．6 Western blot 鉴定目的蛋白7
2．7 细胞接毒实验 7
2．8 RNA提取和反转录实时荧光定量PCR8
2．9 病毒产量减少试验9
3．结果与分析9
3．1 重组质粒的酶切鉴定 9
3．2 Western blot表达鉴定 10
3．3 实时荧光定量PCR 10
3．4 体外评价抗病毒活性11
讨论 11
致谢12
参考文献13
牛Mx1蛋白抑制猪瘟病毒增殖的初步研究
猪瘟（Classical Swine Fever, CSF）是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）引发的严重危害畜牧业生产的烈性传染性疾病之一，被国际动物卫生组织（OIE）列入A类法定传染病。其发病特点是很迅速，病猪的体温会发生高热稽留，微小血管壁变性，最终全身多处小点出血，脾梗死[1]。病毒在分类学上属于黄病毒科（Flavividae）瘟病毒属（Pestivirus）[2]，与其同种同属的还有人类丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)，牛病毒性腹泻病毒（Bovine Viral DlarrhoeaVirus, BVDV）和羊边界病病毒（Borider Disease Virus, BDV）。CSFV属于单股正链RNA病毒，可编码产生12种蛋白，分别有结构蛋白Core，Ems，E1，E2，非结构蛋白Npro，P7，NS2，NS3，NS4，NS4A，NS5A，NS5B[3]。根据毒力的强弱，CSFV分为：强毒株、次强毒株、中间毒株以及弱毒株。CSFV共有3个基因型：1型，包括1.1、1.2和1.3亚型；2型，包括2.1、2.2和2.3亚型；3型，包括3.1、3.2、3.3以及3.4共4个亚型。在我国猪瘟流行中占主导地位的是CSFV2型，其中主要是2.1亚型，特别是2.1b这一分支[4]。针对CSFV并没有特效药治疗，虽然有猪瘟兔化弱毒疫苗C株，具有良好的免疫原性，但是它无法区分野毒感染和疫苗免疫，因此现在对CSFV的研究还主要集中在致病机制和新型疫苗。