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摘要：帕金森病已经成为中老年人常见的运动障碍性疾病之一，其主要病理是多巴胺能神经元的大量减少，目前研究最多的是细胞替代治疗方法。本实验是在体外培养SHSY5Y细胞并利用胶质细胞源性神经营养因子GDNF诱导其分化为多巴胺能神经元，使用western blot的方法检测Ephrin-A3的含量变化来检验实验的成功与否。34345
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毕业论文关键词：SHSY5Y细胞、GDNF、多巴胺、帕金森病、Ephrin-A3
The expression of Eph after SHSY5Y cells differentiation
Abstract: Parkinson's disease is one of the movement disorders in the elderly,it’s main pathology is a significant reduction in dopaminergic neurons. At present,the cell replacement therapy was mostly studied. In this experiment SHSY5Y cells is cultured in vitro and glial cell-line derived neurotrophic factor is used to induce it differentiate into dopaminergic neurons. Using the western blot method to detect changes in the content of Eph to test the success or failure.
Keywords: SHSY5Y cells、GDNF、DA、Parkinson's disease、Ephrin-A3
1 前言
帕金森病是一种缓慢发生的选择性中脑黑质多巴胺能神经元丧失和纹状体多巴胺含量明显减少的神经系统退行性疾病[1]，发病率随年龄而上升，在 65 岁以上的老年人口中约为 1%[2]，极大地困扰了中老年人的正常生活。在正常情况下，大脑黑质中的多巴胺神经元能够利用酪氨酸羟化酶将左旋酪氨酸转化为左旋多巴后再同脱羧酶作用转化为多巴胺。作为神经递质的多巴胺经黑质-纹状体束转运至纹状体的尾状核和壳核细胞中进行履行传递信号的职责。而帕金森病人的多巴胺水平较少直接导致了锥体外系功能的失调，从而出现了静止性震颤、肌僵直、动作减少及平衡障碍[3-4]等帕金森病的常见临床表现。由于帕金森病理主要是黑质多巴胺神经元的变性导致纹状体内多巴胺水平降低，所以目前的药物治疗和外科手术等手段仍旧无法从根本上解决这个问题。随着现代医术的发展，细胞替代治疗开始兴起，能否利用该手段获得多巴胺能神经元并通过细胞移植来恢复神经环路中的多巴胺递质水平来进行帕金森病的治疗[5]，成为医疗界关注及探索的热点。
SHSY5Y细胞即人骨髓神经母细胞瘤细胞株，衍生于人的神经母细胞瘤细胞SK2N 2SH，它具有神经突样的细胞质突起，表达儿茶酚胺能神经元特有的酪氨酸酶羟化酶。虽然SHSY5Y细胞是探讨神经退行性疾病发病机制的常用细胞模型，但SHSY5Y细胞在形态学或基因表达上与脑内神经细胞比都存在较大差异，故需要诱导因子GDNF体外诱导SHSY5Y细胞分化[6]。胶质细胞系源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF），属于转化生长因子β（transforming growth factor β，TGF-β)超家族成员[7]，能够诱导神经干细胞定向分化为多巴胺能神经细胞，并可能对SHSY5Y细胞同样如此。多巴胺能神经元是指主要以酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞、多巴胺转运体(DAT)及促红细胞生成素肝细胞( erythropoietin producing hepatocyte receptor, Eph 受体)等其他表型标志物为特征的神经元。
其中促红细胞生成素肝细胞(Eph 受体)及其配体 ephrin统称为 Eph 蛋白家族[8]，是酪氨酸激酶家族中的最大成员。Eph 受体可分为两个亚类，即Eph A和Eph B[9]。通常EphA 与 EphrinA 通过相互作用并结合成受体- 配体复合物，在神经系统发育、轴突生长导向等方面发挥重要的生理作用。其中EphA1（其配体是Ephrin-A3）能够增加细胞对凋亡刺激的敏感性,因此其配体也具有同样效应[10],该效应对PD患者神经元死亡有作用[11-12]。本研究主要是利用SHSY5Y细胞具有的潜在分化能力，使用诱导因子GDNF进行定向诱导，利用Western Blot的方法检测蛋白Ephrin-A3表达含量的变化以鉴定此次实验的成功与否。