摘要索拉胶（salecan）是Agrobacterium sp.ZX09经好氧发酵产生的一种高黏度水溶性的新型β-1,3-葡聚糖。其具有高水溶性、乳化性，增稠性等优良的物理化学性质,并显现出抗肿瘤，降血脂，减轻便秘，改善肠道微生物的菌群结构等生理活性，在医药和临床有巨大的应用潜能。本课题以索拉胶合成为主体，利用基因敲除（knockout）手段，在分子水平上研究其合成基因及功能，为深入理解索拉胶生物合成机理提供依据。实验结果成功获得ZX09突变型菌株，鉴定证实了索拉胶合成相关的两个基因。20550
关键词  Agrobacterium sp.ZX09   索拉胶   同源重组   三亲接合
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Title    Construction and function study of salecan synthase  knock-out mutant  of Agrobacterium sp.ZX09                                                 
Abstract
salecan is a new type of high-viscosity water-soluble β-1,3-glucan produced by Agrobacterium sp.ZX09. It has excellent physical and chemical properties of high water-solubility, emulsification, thickening etc.and shows the physiological activities of anti-tumor, lowering blood pressure, relieving constipation, improving the intestinal microbial community structure. It would be a great value of application in the pharmaceutics and clinic. We have performed a survey of the biosynthetic mechanism of salecan using Gene knockout technology . we successfully obtain the ZX09 mutant strains and identified two genes associated with salecan synthetic.
Keywords  Agrobacterium sp.ZX09   salecan   Homologous recombination triparental conjugal transfer
目   次
1  绪论    1
1.1  耐盐菌株ZX09简介    1
1.2  索拉胶简介与生物合成    1
1.2.1  索拉胶的结构    1
1.2.2  索拉胶的理化特性    2
1.2.3  索拉胶的生物活性    2
1.3  基因敲除技术     2
1.3.1  基因重组技术    3
1.3.2三亲本接合转移    3
1.4  糖基转移酶简介    3
2  索拉胶合成基因敲除    4
2.1  实验材料    4
2.1.1  实验仪器    4
2.1.2  培养基与试剂    4
2.1.3  试剂盒、工具酶    6
2.1.4  菌株和质粒    7
2.1.5  实验设计的PCR引物    7
2.1.6  本文用到的缩写    8
2.2  实验方法    8
2.2.1  重组载体的构建    8
2.2.2  三亲接合    14
2.2.3  验证PCR    15
3.1  琼脂糖凝胶电泳图分析    18
3.2  测序结果    23
3.3  菌株表型结果     23
结论    25
致谢    26
参考文献    27
附录A    29
附录B    30
附录C    31
1  绪论
1.1  耐盐菌株ZX09简介
Agrobacterium sp.ZX09为本实验室从山东东营海滨的一个岩土样中分离得到的一株新的菌株[1]。本实验室已从形态结构、革兰氏染色、生理生化特征分析、16SrDNA序列对比等方法系统分析了该菌株，确立了其分类学地位。菌株已于2010年1月21日在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：M2010020。 索拉胶生物合成相关基因的敲除及功能研究:http://www.751com.cn/yixue/lunwen_12371.html