LB液体培养基:蛋白胨10g,酵母提取物5g,氯化钠 10g,水1000mL,pH 7.0~7.2。
Htm固体培养基:磷酸二氢钠1g,硝酸钾3g,氯化镁O.2g,无水氯化钙0.07g,氯化亚铁0.0125g,硫酸锰0.003g,氯化锌0.0075g,蔗糖20g,琼脂O.9%左右(8.O-10.0 g),水1000 mL,pH 7.0~7.2。
Htm索拉胶发酵培养基:磷酸二氢钠1g,硝酸钾3g,氯化镁O.2g,无水氯化钙0.07g,氯化亚铁0.0125g,硫酸锰0.003g,氯化锌0.0075g,蔗糖30g,水1000 ml,pH 7.0~7.2。
注:以上培养基均是121℃灭菌20 min后使用。
试剂配方:
TAE缓冲液(50×):Tris碱 242.2 g,EDTA 37.2 g,加入约800 mL去离子水溶解后,加入57.1mL冰醋酸,定容至 1000 mL,室温保存。
Tris-HCl缓冲液(pH 8.0,10mM):50 mL 0.2 M的三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与适量体积的0.1 M盐酸混匀后,用pH计调整pH,定容至1000 mL。
1.0%琼脂糖:称取0.5g琼脂糖固体粉末,加入50ml TAE缓冲液(50×),混合均匀。
安普拉霉素:用无菌去离子水配制50mg/mL的母液,4℃保存,使用浓度为50 μg/mL。
氨苄青霉素(ampicillin):用无菌去离子水配制100mg/mL的母液,用0.22 μm的微孔滤膜过滤除菌后,4℃保存,使用浓度为100 μg/mL。
卡那霉素((kanamycin)用无菌去离子水配制50 mg/mL的母液,4℃保存,使用浓度为50 μg/mL。
氯霉素(chloramphenicol):用无菌去离子水配制50 mg/mL的母液,用0.22 μm的微孔滤膜过滤除菌后,-20℃保存,使用浓度为50 μg/mL。
X-Gal(20 mg/mL):1 g X-Gal干粉溶于50 mL二甲基甲酰胺(DMF)中,小管分装,-20℃保存。
IPTG(100 mM):1.2 g IPTG干粉溶于无菌水中,定容至50 mL,用0.22 μm滤膜过滤除菌后,小管分装,-20℃保存。
SOC培养基:胰蛋白胨20 g/L、酵母提取物5 g/L、NaCl 10 mM、KCl 2.5 mM、MgSO4 10 mM、MgCl2 10 mM、葡萄糖 20 mM。 索拉胶生物合成相关基因的敲除及功能研究(4):http://www.751com.cn/yixue/lunwen_12371.html