图1 基因获得示意图
Fig 1 schematic diagram for Genes
表1 各阶段产物及特性
Table 1 Products and features at different stages
反应引物对    5`位置    3`位置    产物长度(bp)    产物退火温度(℃)
2F-3R    148    619    471    48.0
3F-1R    603    925    322    46.8
2F-1R    148-    末尾    779    48.6
1F-1R    44-         -末尾    885    50.8
2.1.2 引物的设计与合成
使用软件设计出所需要的突变引物。首先对Mhp-FBA的编码区进行扩增。设计引物中应当含有两个酶切位点EcoR I和Hind III，酶切位点的选择与所使用的表达载体对应。设计出的引物序列如下：
Mhp-FBA-1-F：5`- CCCAAAGGAGAATTCCAACCCTAG -3`，
Mhp-FBA-1-R：5`- ATTGCAAGCTTATGCTTTGAATTTGCAGAAC -3`，
下划线处为酶切位点，引物合成全部由金斯瑞生物完成。
2.1.3 模板的制备
取出在-70℃保存的Mhp168株F113，按照DNA粗提取试剂盒说明书上的方法粗提Mhp全基因组DNA，详细步骤如下所示：
（1）取恢复到常温的支原体1mL，高速离心10 min，完全弃去上清；
（2）将支原体沉淀与40 µL ddH2O用移液器充分混匀；
（3）将EP管在水浴锅中沸水浴10 min，之后立刻置于-20℃冰浴10 min（冰箱内进行）；
（4）使支原体恢复到常温;
（5）高速常温离心10 min，上清即是粗提好的Mhp DNA模板。本文中所有高速离心即12000r/min。
2.1.4 扩增Mhp/FBA基因
以2.1.3中提取出的DNA为模板，添加已经设计好的引物进行PCR扩增目的基因。 猪肺炎支原体醛缩酶的致病机制研究(4):http://www.751com.cn/yixue/lunwen_20829.html