图4-7 考马斯亮蓝测定蛋白质含量蛋白标准曲线(0~0.1mg/mL)
    分别得到蛋白浓度0~0.1 mg/mL时的标准曲线：
                  
图4-8 考马斯亮蓝测定蛋白质含量蛋白标准曲线(0.1~0.5mg/mL)
以及得到蛋白浓度0.1~0.5 mg/mL时的标准曲线：
图4-9 考马斯亮蓝测定蛋白质含量蛋白变化规律
将按3.5.3方法测得的吸光度对应图11和图12标准曲线换算成蛋白浓度，作出图13，可以看出，在第24 h测出的铜绿微囊藻的蛋白含量中，四环素空白对照组的蛋白为-0.042 mg/mL，而四环素浓度为1 mg/L、5 mg/L和10 mg/L的蛋白质含量分别为：-0.105 mg/mL、-0.057 mg/mL、-0.060 mg/mL。在第72 h测定的蛋白质含量时，空白组的蛋白含量为1.269 mg/mL，而四环素浓度为1 mg/L、5 mg/L和10 mg/L的蛋白质含量分别为：0.862 mg/mL、0.310 mg/mL、0.543 mg/mL。可以看出空白组的蛋白含量测得最高值，其次是四环素浓度为1 mg/L，而四环素浓度为10 mg/L的实验组测得的蛋白含量最小。这与之前铜绿微囊藻生长曲线的实验数据相比基本相同，仅有5 mg/L浓度的四环素下测得的蛋白含量大于1 mg/L，这可能是因为实验误差。整体而言，四环素浓度越大，测得的蛋白含量越小。

4.5 高效液相色谱检测四环素在铜绿微囊藻液中的降解
4.5.1 标准曲线
    根据3.6.3方法将17个浓度的四环素标准溶液按浓度从小到大依次进样、得到下表四环素浓度与峰面积的对应关系：
表4-4 高效液相色谱法检测四环素浓度标准曲线数据
高效液相色谱法检测四环素浓度标准曲线数据
编号    浓度（mg/L）    峰面积    编号    浓度（mg/L）    峰面积
1    0.0025    未检出    9    0.75    1078
2    0.005    未检出    10    1    1817
3    0.01    未检出    11    2.5    5354
4    0.025    36    12    5    11858
5    0.05    68    13    7.5    17503
6    0.1    89    14    10    20538
7    0.25    328    15    25    61885
8    0.5    739    16    50    157908
9    0.75    1078    17    100    323569

根据峰面积和噪音须满足3被信噪比的关系，在最低浓度的三个四环素标准溶液中都不能满足条件，可视为未检出四环素。第4组，即0.025 mg/L的四环素浓度检测峰面积为36，并满足信噪比条件，仪器对四环素的检出限可确定为0.025 mg/L。
下图是部分四环素标准溶液的谱图出峰效果，横坐标表示时间（×10Min）纵坐标表示吸光度（mAu）。由于后续实验四环素的染毒浓度范围在1 mg/L~10 mg/L之间，因此从左往右自上往下分别选取的四环素浓度0.75 mg/L、1.00 mg/L、2.50 mg/L、5.00 mg/L、7.50 mg/L、10.00 mg/L的谱图。

图4-10 四环素标准溶液谱图
可以发现在进样2分钟后检测出溶剂峰，而四环素的峰值大约出现于6分钟以后。且峰高和峰面积均随四环素浓度的增大而增大。下表是各浓度四环素对应的峰面积。 四环素对蓝藻的急性毒性研究+实验讨论(17):http://www.751com.cn/yixue/lunwen_762.html