2.3.4单因素试验及黄酮含量测定

单因素试验分别对超声频率、超声时间、乙醇体积分数和料液比进行试验。分别选取超声频率50、60、70、80、90Hz，超声时间30、40、50、60、70min，乙醇体积分数10、20、30、40、50%，料液比1:30、1:40、1:50、1:60、1:70进行单因素试验。

黄酮含量测定选用紫外分光光度法，以提取溶剂进行调零，分别测定总黄酮提取液的吸光度，对总黄酮提取量进行计算，计算公式为：

悬铃木叶总黄酮提取量/(mg/g) =  （2-1）

2.3.5响应面法优化提取条件

综合单因素试验结果，应用响应曲面法优化悬铃木叶中总黄酮的提取工艺条件，在4因素3水平上进行对悬铃木叶总黄酮的提取工艺的优化。

2.3.6体外氧化性测定来!自~751论-文|网www.751com.cn

参考文献[15]的方法，对悬铃木叶中总黄酮对羟自由基的清除率和对超氧阴离子自由基的清除率进行测定。

（1）悬铃木叶中总黄酮对羟自由基的清除率的测定

取5支试管依次向其中加入2.0mmol/L FeSO4 2.0 mL、1.0 mmol/L H2O2 2.0mL、6.0mmol/L 水杨酸3.0mL，震荡摇匀，37 ℃水浴加热15分钟后在346nm处测其紫外吸光度A0。然后向5支试管中分别加入浓度为0.1989mg/mL的黄酮提取液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL和纯水0.8、0.6、0.4、0.2、0.0mL，摇匀，水浴加热15分钟后测其紫外吸光度Ax。对照实验：用2.0mL蒸馏水取代过氧化氢溶液，重复上述操作，测其紫外吸光度Ax0，则提取物对羟自由基的清除率为：

羟自由基清除率/%= （2-2）