色谱柱:
Chiralpak ID-3
规格:150*4.6mm 粒径:3μm;
流动相:甲醇:水=95:5/90:10/85:15/82.5:17.5/80:20(V/V)
流速:0.4ml/min,0.5ml/min,0.6ml/min, 0.7ml/min,0.8ml/min;
UV检测波长:282nm;
进样量:5μL;
柱温为:15℃,20℃,25℃,30℃,35℃,
控温精度: 0.5℃。
2.3.3 中间体C色谱条件
色谱柱:Chiralcel OD
规格:150*4.6mm 粒径:5μm;
流动相:正己烷:异丙醇=7:3 ;
正辛烷:异丙醇=98:2;
正庚烷:异丙醇=98:2
三乙胺浓度:0.3%
流速:分别为0.7 ml/min;0.5 ml/min;0.5 ml/min
UV检测波长:210nm;
进样量:20μL;
柱温为:17.6摄氏度(室温),
控温精度: 2℃。
3 HPLC拆分苯丙氨醇
3.1 实验步骤
3.1.1 色谱仪的准备工作
本实验采用实验仪器(1)由安捷伦科技有限公司出产的Agilent technologies 1260 infinity 型液相色谱仪完成。实验时先打开工作站电脑,启动色谱工作站程序,再依次打开色谱仪各个模块,最后使各个模块与工作站相连。进行一些基本设置,设置波长,流动相比例,检测通道,设置测样方法,设置测样序列等。待到基线走稳后 ,可以开始进行样品的拆分工作。
3.1.2 实验试液的配制
(1)流动相的配制
用量筒量取适量的甲醇一份和水两份,用砂芯漏斗进行过滤,然后取一份水加入一定比例的三乙胺,调节三乙胺浓度至1%,摇匀静置后备用。由于实验仪器自动混合样品并带有脱气机,故在实验时,通过调节已配置流动相与纯试剂的比例即可。
(2)样品的配制
称取少量的样品,称量后溶于流动相溶液中,并定容。超声5min之后静置,放入冰箱备用。
3.2 实验内容
3.2.1 使用不同的流动相配比拆分样品
本组实验采用不同流动相配比为甲醇:水=70:30/65:35/60:40/55:45。设置相应的流动相配比,设置泵的流速为0.6min/ml,三乙胺含量为0.3%,波长为258nm,温度为40℃。每组流动相重复两次,测完后需手动调节流动相比例,再重复测样。
3.2.2 在不同的三乙胺浓度下拆分样品
本组实验采用不同的三乙胺浓度为0.1%,0.2%,0.3%,0.4%,0.5%,0.6%,设置泵的流速为0.6min/ml,流动相比例为甲醇:水=60:40,调节相应三乙胺浓度,检测波长为258nm,温度为40℃。同一三乙胺浓度下重复两次,测完后需手动调节各储液瓶中的取液比例,使之达到所需的三乙胺浓度,再重复测样。
3.2.3 在不同流速下拆分样品
本组实验所测流速分别为0.4min/ml,0.5min/ml,0.6min/ml。设置检测波长为258nm,流动相比例为甲醇:水=60:40,设置相应流速,三乙胺浓度为0.3%,温度为40℃。每组流速重复两次,测完后需手动改变流速,再重复测样。
3.2.4 在不同温度下拆分样品
本组实验所测试温度分别为25℃,30℃, 35℃, 40℃,45℃,流动相为甲醇:水=60:40,设置泵的流速为0.6min/ml,三乙胺含量为0.3%,波长为258nm,设置相应温度。每组温度重复两次,测完后需手动改变温度,再重复测样。
4 HPLC拆分奈必洛尔
4.1 实验步骤
4.1.1 色谱仪的准备工作
本实验是在实验仪器(2)美国戴安公司的DIONEX U-3000型液相色谱仪上完成的。使用时先打开电脑,启动色谱工作站程序,然后依次打开各个色谱仪模块,最后使各个模块与工作站相连。进行一些基本设置,设置波长,流动相通道以及比例,柱温箱温度,设置模块方法,设置测样序列等。等到基线走稳后 ,开始进行样品的拆分工作。
4.1.2 实验试液的配制 HPLC使用键合型多糖手性柱拆分对映体(3):http://www.751com.cn/huaxue/lunwen_2107.html