分析实验数据,根据lnk1、lnk2、lnα与1/T作图,数据表如下:
表6.5 lnK1、lnK2与1/T数据表
温度(℃) 15 20 25 30 35
1/T 0.00347 0.00341 0.00335 0.00329 0.00325
k1 1.697 1.512 1.364 1.094 1.239
k2 2.331 2.089 1.883 1.495 1.710
lnk1 0.527 0.413 0.311 0.090 0.214
lnk2 0.846 0.737 0.633 0.402 0.537
根据上表数据作图,如下:
图6.1 lnK1、lnK2与1/T之间线性关系图
lnα与1/T的数据表如下:
表6.6 lnα与1/T数据表
温度(℃) 15 20 25 30 35
α 1.373 1.378 1.376 1.360 1.375
lnα 0.314 0.316 0.318 0.310 0.315
1/T 0.00347 0.00341 0.00335 0.00329 0.00325
分析实验数据,根据lnα与1/T作图:
图6.2 20-35℃lnα与1/T之间线性关系图
图6.3 lnα与1/T散点图
小结:
在流速为0.70min/ml,流动相为甲醇:水为82.5:17.5时,在加入0.3%三乙胺的条件下,分别温度在15℃,20℃,25℃,30℃和35℃时,样品的分离度随着温度的升高而缓慢增长,在35℃时,样品的分离度达到最大。故选择35℃为最佳分离温度。
根据lnk1、lnk2与1/T图中R2均大于0.97表明线性较好。分析lnα与1/T的图,找到相关线性关系。20摄氏度时线性发生转折,在相关文献中[1]可找到所致原因。根据所做图谱可得线性拟合方程y = 0.0341x + 0.2075。可求得相关参数△△H0=-0.284KJ/mol,△△S0=1.725KJ/mol。前者为负而后者为正,说明熵驱动和焓驱动对手性识别均有贡献。而图中得出应在20摄氏度时洗脱机理发生改变。△△H0的绝对值为0.068Kcel/mol,小于0.1,则可以得到手性识别仅仅归于立体阻碍,没有其他作用力。
6.2 小结
通过以上的实验结果,可以得出奈必洛尔的拆分情况,结论如下:
在35℃下,流动相为甲醇与水=82.5:17.5时,流速为0.70min/ml,在加入0.3%三乙胺的条件下,样品可以得到完全分离,且所选条件对实验仪器及所用色谱柱手性柱友好。
最优条件下拆分谱图如下:
图6.3 奈必洛尔在最优条件下拆分效果
7 药物中间体(C)拆分尝试及各流动相对比
7.1色谱仪的准备工作
打开电脑,双击Windows桌面上的FL9500色谱工作站图标,即启动本系统。之后选择与之相连的仪器信号通路。同时打开FL2200型UV检测器和FL2200型高效液相色谱泵,设置检测波长为210nm,流速为0.7min/ml。等到基线走稳后,可开始进行样品的检测工作。
7.2正己烷与异丙醇体系下拆分尝试
7.2.1实验试液的配制
(1)流动相的配制
用量筒量取不同比例的正己烷和异丙醇,用砂芯漏斗进行过滤,然后加入一定比例的三乙胺,摇匀静置后备用。
(2)样品的配制
称取少量的样品C,溶于流动相溶液中,超声5min,之后静置,备用。 HPLC使用键合型多糖手性柱拆分对映体(9):http://www.751com.cn/huaxue/lunwen_2107.html