d.若平板上有2个或2个以上菌落重叠，肉眼可辨别时仍以2个或2个以上菌落计数；若平板生长有链状或片状、云雾状菌落，菌落间无明显界线时，一条链、片作为一个菌落计，但若链、片上出现性状与链（片）状菌落不同的可辨菌落时，仍应分别计数，若生长蔓延的较大的片状菌落或花斑样菌落，其外缘有若干性状相似的单个菌落，一般不宜作为计数用。
e.菌落生长呈蔓延趋势者，细菌需在24h，霉菌需在48h作初步点计，在点计霉菌菌落时，轻轻翻转平板，勿反复翻转，否则使早期形成的孢子散落在平板的其他部位，又萌生新的霉菌菌落，导致计数误差。
f.在3天点计细菌，培养5天点计霉菌时，如菌落极小，不易辨认，可延长培养时间5～7天，再点计菌落数。
（6）菌落形态
a.霉菌菌落形态:具有放射状或树状分枝的菌丝是霉菌菌落的特征。初形成时，多无色透明，有明显的折光性，在较暗的背景下，以透射光观察，易于识别。少数生长在琼脂表面的菌落，初起时，似为一小块水迹，需借助暗反射光才能看清。成熟的霉菌菌落多数有各种颜色 的孢子形成，随种而异，极易判定。
b.酵母菌菌落形态:在玫瑰红钠琼脂平板上，多数为圆形凸起，边缘整齐，表面光滑湿润，呈不透明乳脂状，各阶层白色或粉红色。少数表面粗糙或皱褶，有的菌落周边呈细分枝状。位于琼脂内的菌落，可呈铁饼形、三角形及多角形。菌落外观与细菌菌落不易区别时，应挑取菌落，用水制片，置高倍显微镜下观察，其细胞个体比细菌大数倍，多为圆形或卵圆形，绝大多数为出芽繁殖。当平板内酵母菌菌落甚多时，常有酒香气。
c.在YPD琼脂平板上的菌落与玫瑰红钠平板上的形态相似，但稍大，多数为乳白色。
2.5细菌内毒素检查
2.5.1供试品溶液的制备：
某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。一般要求供试品溶液的PH值在6.0～8.0的范围内。对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液（或其稀释液）的PH值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节PH值。酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
2.5.2内毒素限值的确定
药品、生物制品的细菌内毒素限值（L）一般按公式(2-1)确定： 公式（2-1）
式中：L为供试品的细菌内毒素限值，以EU/ml、EU/mg 或EU/U（活性单位）表示；
K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/(kg×h)表示，注射剂K=5EU/(kg×h)，放射性药品注射剂K=2.5EU/(kg×h)，鞘内用注射剂K=0.2EU/(kg×h)；
M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/(kg×h)、mg/(kg×h)或U/(kg×h)表示，人均体重按60kg计算，人体表面积按1.62m2计算。注射时间若不足1h，按1h计算。若供试品按体表面积给药，供试品每平方米体表面积剂量乘以0.027即可转换为每千克体重剂量（M）。
2.5.3供试品最大有效稀释倍数（MVD）确定
最大有效稀释倍数是指在试验中供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。用公式（2-2）来确定MVD：
   公式（2-2）式中：L为供试品的细菌内毒素限值；
c为供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，则c等于1.0ml/ml，当L以EU/mg或EU/U表示时，c的单位需为mg/ml或U/ml。如供试品为注射用无菌粉末或原料药，则MVD取1，可计算供试品的最小有效稀释浓度；
λ为在凝胶法中鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml），或是在光度测定法中所使用的标准曲线上最低的内毒素浓度。用公式（2-3）来确定供试品溶液的浓度c： 聚乙烯微孔过滤膜处理纯水的性能研究(9):http://www.751com.cn/huaxue/lunwen_2288.html