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盐胁迫下转基因拟南芥的生理变化研究(3)

时间:2020-06-26 08:56来源:毕业论文
③铁盐(200) 500ml FeSO47H2O 2.78g EDTA2Na 3.73g 用HCl调PH 配置的步骤:配5L营养液要加大量营养液(10)500ml、微量(200)25ml、铁盐(200)25ml、水4450ml。 1.3拟南



③铁盐(200×)             500ml
FeSO4•7H2O                  2.78g
EDTA•2Na                   3.73g
用HCl调PH
配置的步骤:配5L营养液要加大量营养液(10×)500ml、微量(200×)25ml、铁盐(200×)25ml、水4450ml。
1.3拟南芥的处理
为分析OsSTSL2 基因对盐胁迫的响应特点,用适合的浓度的NaCl处理拟南芥纯合株系, 在移栽到营养土中后,用Hogland营养液进行浇灌大概10天后,拟南芥长势正好的时候,改用加100mM NaCl的营养液进行浇灌,大概14天。
1.4实验方法
1.4.1叶绿素的测定
1).取水稻叶片顶部若干,剪碎(大小一致)混匀,称0.05g两份。
2).分别倒入20ml刻度试管中,用量筒加20ml混合液(无水乙醇:丙酮:水=4.5:4.5:1),黑暗中静提24小时,期间振荡2-3次。
3).用分光光度计,在波长645nm、663nm处分别测定浸取液的吸光值。以混合液为空白。
4).按下列公式计算叶绿素的含量(单位:mg/g.FW)。
Ca=12.7D663-2.59D645    Cb=22.9D645-4.67D663
含量(单位:mg/g.FW)= (C * V)/(1000 * W) = C * 0.4
1.4.2花青素的测定
1).花青素的提取
    拟南芥叶片叶片去脉剪成1~2 mm碎片,随机取样,准确称量0.2 g置于烧杯中,加10ml盐酸乙醇溶液,杯口用封口膜扎紧以防挥发,置室温避光处浸提2小时,至肉眼观察叶组织完全变白取出过滤,用2%盐酸甲醇溶液定容至25ml。
2).测定 
 以0.1 mol•L-1的盐酸乙醇溶液做参比液,在分光光度计测定提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。
再依据公式
1).计算花青素的光密度值
         ODλ=(OD530-OD620)-0.1(OD650-OD620)
2).计算花青素含量
ODλ:花青素在530nm波长下的光密度
ε:花青素摩尔消光系数4.62×106
v:提取液总体积(ml)
m:取样质量(g)
1000000:    计算结果换算成nmol的倍数
1.4.3电导率的测定
1).取大小相当的小叶0.2g,蒸馏水冲洗干净,用吸水纸吸干水分;
2).置于20ml具塞刻度试管,定容至20ml,并使叶片浸入水中;
3).浸泡2h后用DDS一307型电导率仪测定电导率R1;
4).沸水浴上加热15min,冷却后测定电导率R2;
5).计算相对电导率:R1/R2x100% 。 盐胁迫下转基因拟南芥的生理变化研究(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_55339.html
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