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1.8 荧光素在医学上的应用 10
1.9 荧光素的合成方法 12
1.10 本章小结 12
第2章 实验部分 14
2.1 实验仪器与试剂 14
2.1.1 试剂 14
2.1.2仪器 15
2.2 实验操作 15
第3章 全文总结及展望 25
3.1 全文总结 25
3.2 课题研究展望 25
致谢 26
参考文献 27
第一章 绪论
1.1引言
生物的发光现象普遍存于自然界生物中。其中大多数发光生物存在于海洋中，但在陆地上也有少许存在。而在陆地生物中，昆虫是主要的发光种类。
生物体内产生生物化学反.应将化学能转化为光能，释放光子这是生物发光现象形成原因。生物发光反应原因是一种酶，荧光素酶催化底物反应。荧光素的酶催化需要氧气的参与。在反应过程中会生成一种不稳定.的中间物。中间物分解.后产生具有高能的激发态产物，当激发态产物返回到稳定态产物时释放能量并且发出光子。
荧光素是生物发光反应体系中的重要因素，对于生物发光起着非常重要的作用。在荧光素酶发光体系中，荧光素主要作为光子的直接载体.和能量的传递物质。随着荧光素的应用范围越来越广，荧光素的应用价值也越加重要。
荧光素酶作为一种检测方法应用在多个领域中，如.基础快速检测、科学研究、临床医学、环境监测等。通常在进行活体成像时先将荧光素酶基因克隆到宿主细胞中.使其得到表达，检测时再向细胞内注入荧光素发生荧光反应。荧光素反应产生荧光进行成像，可是此操作方法操作复杂.，需要外界注入荧光素而且这样的荧光也达不到理想的效果。如果能对荧光素的性质和生物合成途径有进一步的认识，了解合成过程中所需要的各种基因并且将这些基因克隆.出来，让宿主细胞自身合成荧光素。重组细胞就不需要从外界注入荧光素.，到那时生物发光作为一种检测手段它的应用将至于极其重要的位置。
1.2荧光素的简介
光素，中文别名为荧光素（英语：Fluorescein，又称为荧光黄）,水溶，CAS号为2321-07-5。
荧光素是一种合成有机化合物，外观为暗橙色/红色粉末，可溶于乙醇，微溶于水。在蓝光或紫外线照射下，发出绿色荧光。溶于冰乙酸、热乙醇、DMF、和丙酮；不溶于二氯甲烷、水、氯仿、苯和乙醚。最大吸收波长493.5、460nm。荧光素与碳酸钠（钾）、氢氧化钠（钾）等强碱反应，生成荧光素钠（钾）。易溶于水，具有强烈绿色荧光。在多种应用中被广泛用作为荧光示踪物。保存在密封容器，储存在阴凉，干燥的地方。
1.3荧光素的种类
荧光素是具有荧光特性的染料，.荧光类染料物质种类很多，目前常用的荧光素有如下几种。
四甲基异硫氰酸罗丹明(Tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC) TRITC为罗丹明的衍生物，呈紫红色粉末，较稳定。最大吸收光波长为 550nm，最大发射光波长为620nm。呈现橙红色荧光，与FITC的翠绿色荧光形成对比。可应用于双重标记和对比染色应用。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。
多甲藻叶绿素蛋白 （PerCP）是在甲藻和薄甲藻的光学合成器中发现的，是一种蛋白复合物，分子量约为35，最大激发波长的峰值在490nm附近，当被488nm氩离子激光激发后，发射光的峰值约为677nm。FL3探测器检测PerCP。