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4）溶解氧：溶解氧的影响样品中溶解氧浓度随着温度的升高呈下降变化。另外，在藻类多的河流湖库水体有时因碳酸同化作用产生的氧可能达到过饱和状态。这样的水样在(20±1)℃下培养时会产生气泡，造成实验误差，所以应将水温升至25℃左右减少溶解氧，然后再降至20℃左右，曝气5～10min后作为测定水样。另外，稀释水中的溶解氧过高或过低，也会导致BOD5实验失败。稀释水溶解氧过高会因过饱和溶解氧自行逸出产生气泡，造成BOD。测定误差，过低则不足以氧化水样中的有机物。
5）硝化作用：水中有机物的生物氧化分解过程大体上可分为两个阶段。第一阶段为有机物中碳和氧在微生物的作用下氧化为二氧化碳和水，此阶段称为碳化阶段，在20℃时完成碳化阶段大约需要20d。第二阶段为含氮有机物和氨在硝化细菌作用下被氧化成亚硝酸盐和硝酸盐，称为硝化阶段，在20℃时完成硝化阶段大约需要100d。根据BODs测定所规定的条件和定义来看，作为水体有机污染程度指标的BOD5值，主要为第一阶段的耗氧量，若在BOD5的测定过程中有硝化反应存在，硝化作用就会造成测定结果偏高。在监测实践中发现，标准物质、工业排放的原水和较为清洁的地表水(COD<20mg／L)，硝化作用根本不发生或很不显著，对BOD。的测定无显著影响，而对于受粪便污染的水体、生活污水、生化处理池的出水因其中含有大量硝化菌，硝化作用的影响显著，需加入丙烯基硫脲硝化抑制剂，抑制硝化作用对BOD5测定的影响。
2.1.2基于氧荧光猝灭速率法的生化需氧量检测
（1）原理
利用氧荧光猝灭速率的方法，结合自行构建的BOD光纤传感装置进行海水中生化需氧量(BOD)含量检测。考察了四种筛选的海洋耗氧菌种在四甲基硅氧烷(TMOS)、二甲基二甲氧基硅烷(DiMeDMOS)和聚乙烯醇(PVA)包埋固定情况下，对不同浓度的葡萄糖-谷氨酸(GGA)标准溶液的荧光响应情况。BOD敏感膜的荧光响应在0.2~30mg/L浓度范围内呈良好的线性关系,对2mg/L标准溶液测定的相对标准偏差为25% (n=6),响应时间(t95%)为40min,BOD敏感膜使用寿命大于12个月。实际海水样品检测表明,利用BOD敏感膜检测得到的结果与国标BOD5 方法之间存在较好的一致性。
（2）优点
检测过程不消耗氧，不需要参比电极及电解液，性能稳定。测定时间短。
2.1.3测压法
（1）原理
把水样或经过预处理的水样注入培养瓶内，同时放入CO2吸收剂（NaOH），然后把培养瓶密封置于20度恒温箱内，在一定搅拌速度下对瓶内试样进行培养。样品中的有机物经过生物氧化物作用消耗水中的溶解氧，产生二氧化碳被氢氧化钠吸收。培养瓶内上部密闭空间内的氧气不断的供给试样中微生物以满足其呼吸过程中的需氧量，这就造成了培养瓶内上部密闭空间内气体氧分压的下降，样品BOD值与瓶中氧气压力下降的程度成正比。所以用差压计测出氧分压的下降量即可测出水样中的BOD值。
（2）优点
具有直观性：直接读数节省时间。样品一般不用稀释具有累加性。可以随时了解生化状况，即不同时间BOD的值。结果与传统方法差异不大准确可靠。BOD5 测定是一种经验方法，是由生物化学和化学作用共同产生的结果。与传统的接种稀释法相比，测压法（又称连续耗氧量–呼吸计量法）最大限度模拟自然环境，给微生物提供足够的溶解氧及与有机物充分混合的条件，加快BOD反应速率，提高有机物分解率，其测定值比传统法更能表征水中有机物含量及可生化性。基于测压法原理的HachBODTrakTM Ⅱ测试仪操作简单、安全（无汞测压），且测量值为直读式，便于随时观测，不受测定时间限制( 测定时间内，数据自动存储可于日后再读取数据)，准确度、精密度均能满足要求，是一种值得推广的测定方法。