不同提取方法提取酵母RNA的比较

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摘要：利用浓盐法和稀碱法提取酵母RNA，对提取的RNA的重量、含量、提取率、蛋白质含量进行比较。结果表明：稀碱法提取RNA的重量和蛋白质含量比浓盐法的高，但RNA的含量和RNA的提取率比浓盐法的低。68673

毕业论文关键词：浓盐法，稀碱法，酵母，RNA，蛋白质

Abstract: The RNA of yeast was extracted using thick salt method and thin alkali method. RNA weight, content, extraction rate and protein content were compared. The results show that: weight and protein content of RNA by thin alkali method were higher than thick salt method, but the content of RNA and RNA extraction rate were lower than thick salt method.

Keywords: thick salt method, thin alkali method, yeast, RNA, protein

1 前言 5

2 材料与方法5

2.1 实验材料、试剂与器材5

2.2 方法5

2.2.1 浓盐法提取酵母RNA5

2.2.2 稀碱法提取酵母RNA 6

2.2.3 蛋白质含量的测定6

2.2.3.1 蛋白质标准曲线的制作6

2.2.3.2 提取RNA中蛋白质含量的测定 7

2.2.4 RNA含量的测定7

3 结果与分析7

3.1 蛋白质的标准曲线7

3.2 两种提取方法提取RNA的比较8

结论 9

参考文献 10

致谢 11

附录 12

1 前言

RNA是指导蛋白质合成的一种重要的生物遗传物质，主要分布在细胞质中。从微生物中提取RNA是最有效的方法，因此核酸的丰富资源是微生物【1】。RNA主要有3大类：核糖体RNA，转运RNA，信使RNA。其中核糖体RNA占RNA总量的80%以上。一般我们所说的从酵母中提取的RNA就是指核糖体RNA，通常RNA在酵母中占2.7%—15%，在细菌中占5%—25%，在霉菌中占0.7%—28%【2】。工业上大量生产RNA虽然多以微生物为原料，但其中RNA提取和制备最为理想的原料是酵母。因为酵母核酸中DNA（0.03%—0.516%）比RNA（2.67%—10.0%）少很多，而且收集菌体比较容易，RNA也比较容易分离【3】。提取后的菌体蛋白质仍然具有非常高的应用价值[4]。文献综述

RNA的提取方法有很多，浓盐法和稀碱法是工业上最常用的，稀碱法是利用稀碱溶解细胞壁，从而将RNA释放出来，稀碱法提取RNA的时间短，但是要注意的是稀碱条件下的RNA不稳定，易于被稀碱分解【5】。浓盐法是在加热条件下利用高浓度的盐来使细胞膜的通透性改变，从而将细胞中提取出来的RNA释放。浓盐法这种方法比较容易掌握，而且浓盐法提取出来的RNA颜色比较好；使用浓盐法提取RNA时必须要注意的一点就是温度，尽量避免在20—70℃之间停留过长时间，因为这是磷酸单脂酶和磷酸二脂酶作用的范围温度，如果在这时间段停留时间过长会严重影响RNA的提取率，因为RNA都被降解了。在90—100℃加热的条件下可以使蛋白质变性，破坏磷酸单脂酶和磷酸二脂酶的活性，从而有利于RNA的提取【6】。本实验采用不同的提取方法提取酵母RNA，比较不同提取方法对酵母RNA的影响，为生化实验教学提供理论与实验基础。

2 材料与方法

2.1 实验材料、试剂与器材

活性干酵母、乙醇（95%）、NaCl、6 mol/L HCl、0.04 mol/L氢氧化钠溶液、酸性乙醇溶液、牛血清白蛋白标准溶液（1000 μg/ml）、蛋白试剂考马斯亮蓝G-250溶液、量筒（50 ml）、烧杯（250 ml，50 ml）、布氏漏斗（60 mm）、天平、冰箱、试管、三角瓶（150 ml）、水浴锅、试管夹、离心管、离心机、玻璃棒、吸滤瓶（500 ml）、可见分光光度计、紫外分光光度计、比色皿、分析天平、刻度吸管、试管架。