不同提取方法提取酵母RNA的比较(2)

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2.2 方法

2.2.1 浓盐法提取酵母RNA

（1）提取：准确称取活性干酵母15 g，倒入150 ml三角瓶中，加入15 g NaCl，150 ml水，迅速搅拌均匀，置于沸水浴中提取1 h，期间不时搅拌。

（2）分离：取出三角瓶，立即放入冰水中冷却，冷却完毕后转入离心管中离心（3500 rpm/min）10 min，使菌体残渣等物质和提取液分离

（3）沉淀RNA：将离心后得到的上清液倒入500 ml烧杯中，并置于冰水中冷却到10 ℃以下，向烧杯中的上清液中缓慢加入100 ml的乙醇（95%），并不时搅拌，放入冰水中10 min，使沉淀充分，颗粒变大。

（4）抽滤洗涤干燥：将上述提取液离心（3000 rpm/min）10 min。得到RNA沉淀。将得到的RNA沉淀放入10 ml小烧杯中，用乙醇（95%）不断充分搅拌洗涤，然后利用真空泵抽滤，再用乙醇（95%）淋洗2次，继续抽滤，并干燥。因为RNA不溶于乙醇，洗涤可以使沉淀疏松来!自~751论-文|网www.751com.cn 、脱水，便于干燥、过滤，并且可以去除色素和可溶性脂类等杂质，提高纯度。

2.2.2 稀碱法提取酵母RNA

称取15g活性干酵母，倒入研钵中研成粉，倒入90 ml 0.04 mol/L氢氧化钠溶液，并不断研磨，转入150 ml三角瓶中，在沸水浴中提取30 min，期间不时晃动，30 min后拿出来放入冰水中冷却。将冷却好的提取液（少量氢氧化钠洗瓶）倒入离心管中离心（3000rpm/min）15 min。取出上清液缓缓倒入早已加好30 ml酸性乙醇的250 ml烧杯中，放置10 min并不时搅拌。等核糖核酸完全沉淀后离心（3000 rpm/min）3 min，去除上清液，沉淀转入50 ml小烧杯中，加入乙醇（95%）充分搅拌洗涤。用真空泵抽滤，乙醇（95%）淋洗2次，继续抽滤，并干燥。