样品中总黄酮含量测定:精密量取供试品溶液1 mL于25 mL容量瓶,按上述操作进行显色反应,以60%乙醇溶液为空白对照,于420 nm下测定吸光值,并根据回归方程计算样品中总黄酮含量。
1.2.3绿原酸、咖啡酸、迷迭香酸含量的测定 高效液相色谱法。精密称取样品粉末1.0 g,置于锥形瓶中,加入40%乙醇40 mL,密塞,称定重量,超声提取100 min,放冷后密塞,再次称定重量,用40%乙醇补足重量,提取液过0.45 μm微孔滤膜,续滤液即为供试品溶液,备用。
绿原酸、咖啡酸和迷迭香酸对照品溶液配制:分别精密称取绿原酸、咖啡酸和迷迭香酸对照品适量,加无水乙醇溶解定容,4℃贮藏,配成浓度分别为20.16, 25.30,121.40μg •mL-1的标准品溶液。
对活血丹中绿原酸(CA)、咖啡酸(Caffeic acid)和迷迭香酸(RA)的液相色谱测定方法进行考察,确定检测条件为:以乙腈(A)—0.01%磷酸(B)为流动相进行梯度洗脱,洗脱程序为:0~15 min,A:10%~15%;15~20 min,A:15%~17%;20~23 min,A:17%~25%;23~33 min,A:25%~35%;33~36 min,A:35%~95%;36~38 min,A:95%;38~43 min,A:95%~10%;43~45 min,A:10%,色谱柱为迪马钻石plus C18,4.6 × 250 mm,5 μm;检测波长为326 nm;流速为0.8 mL•min-1;进样量为10 μL。
1.2.4熊果酸、齐墩果酸含量的测定精密称取样品粉末0.5 g,置于锥形瓶中,加入88%乙醇39 mL,密塞,称定重量,超声提取60 min,放冷后密塞,再次称定重量,用88%乙醇补足重量,提取液过0.45μm微孔滤膜,续滤液即为供试品溶液,备用。
分别精密称取齐墩果酸、熊果酸对照品14.1mg和11.2 mg,用甲醇溶解,定容至25 mL,4 ℃贮藏,配成浓度分别为0.564 mg•mL-1和0.420 mg•mL-1的标准品溶液。
对活血丹三萜酸液相色谱测定的流动相体系,流动相洗脱体系等参数进行考察,确定检测条件为:以乙腈(A)—0.05%乙酸铵(B)为流动相进行等度洗脱,洗脱比例(A : B)为77:23,色谱柱为迪马钻石plus C18,4.6 × 250 mm,5 μm;检测波长为210 nm;流速为0.5 mL•min-1;进样量为10 μL。
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