菜单
  

    1.2.2  黄瓜根际土菌体细胞的提取
        采用多次匀浆-差速离心法[17]提取根际土中菌体细胞:10 g新鲜土壤用100 ml 0.2% 焦磷酸钠溶液重悬,2,200 rpm匀浆处理60 s 3个循环,间歇冰浴,防止过热。土壤匀浆液加0.2 %焦磷酸钠溶液稀释到500 ml,1,000 g离心10 min,使菌体与土壤初步分离。沉淀重新匀浆60 s,低速离心,重复3次,合并上清,12,000 g离心20 min,弃上清,沉淀用50 ml PBS 缓冲液重悬,即为根际土菌体细胞悬液,4 ℃暂时保存。
    1.2.3  生物膜共培养[5]
    将过夜活化的菌株SQR9接种于无菌LB液体培养基中,37 °C,170 r*min-1培养至对数生长期,OD600约为1.0。离心收集菌体后,用等体积的MSgg液体培养基重悬菌体。生物膜培养采用24孔细胞培养板,板上放置24孔滤网,在培养孔中加入0.5 ml MSgg培养基,1 ml PBS缓冲液,菌株SQR9悬液20 μl,0.5 ml根际土菌体悬液或0.5 ml PBS缓冲液作对照,于37 ℃静置培养24 h。
    1.2.4  提取生物膜和培养液中的DNA
        取出24孔滤网,生物膜残留在滤网上,在新的无菌24孔细胞培养板上加2 ml PBS缓冲液,放入24孔滤网洗涤生物膜,去除游离细胞,重复洗涤3次,6个培养孔的生物膜的合为一个生物膜样品,并收集剩余培养液及生物膜洗涤液作为游离细胞样品,分为菌株SQR9生物膜、菌株SQR9加黑土生物膜、菌株SQR9游离细胞、菌株SQR9加黑土游离细胞4个处理,每个处理3个重复。样品用PowerSoil DNA Isolation Kit(MoBio)土壤DNA提取试剂盒提DNA。
  1. 上一篇:水稻响应镉胁迫相关转座子鉴定
  2. 下一篇:耐重金属内生细菌的筛选及其吸附铅镉的特性
  1. 常温土壤环境中嗜热香草...

  2. 一株羽毛降解菌的筛选与鉴定

  3. 降解羽毛蛋白菌株的筛选及初步鉴定

  4. 一株降解羽毛菌株的筛选与鉴定

  5. 菌株djl-10降解土壤中多菌灵的特性研究

  6. 一次平衡法研究水稻土中...

  7. 镜月湖水体溶解氧的昼夜变化

  8. 乳业同业并购式全产业链...

  9. 电站锅炉暖风器设计任务书

  10. 当代大学生慈善意识研究+文献综述

  11. 大众媒体对公共政策制定的影响

  12. 酸性水汽提装置总汽提塔设计+CAD图纸

  13. java+mysql车辆管理系统的设计+源代码

  14. 十二层带中心支撑钢结构...

  15. 河岸冲刷和泥沙淤积的监测国内外研究现状

  16. 杂拟谷盗体内共生菌沃尔...

  17. 中考体育项目与体育教学合理结合的研究

  

About

751论文网手机版...

主页:http://www.751com.cn

关闭返回