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    1.2.2  激光共聚焦显微镜测定植物根细胞中一氧化氮(Nitric oxide, NO)含量
        取不同处理的油菜植株根部置于载玻片上,将DAF-FM DA (4-amino-5methylamino-2’, 7’-difluorofluorescein diacetate, NO荧光探针)稀释1000倍后,将植物根部浸泡于稀释液中15 min使根部细胞与探针充分接触,之后用吸水纸将稀释液吸干后,用PBS(pH=7.4)洗涤三次后,滴加PBS,压片,制作根部临时装片。用激光共聚焦荧光显微镜直接观察荧光强度(使用495 nm激发荧光,观察515 nm荧光强度)。比较三品系的荧光强度。
    1.2.3  TBA法测定植物组织中丙二醛(Malondialdehyde, MDA)含量[8]
    称取不同处理的待测植物叶片组织样品0.2 g,加入2 mL 10%三氯乙酸(Trichloroacetic acid, TCA)溶液,将植物组织研磨至匀浆,匀浆4000 rmp离心10 min后取上清。向上清内加入2 mL 0.67% 硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid, TBA)溶液,混匀后沸水浴加热15 min,迅速冷却后4000 rmp 离心。取上清液测定其在450 nm、532 nm、600 nm下的吸光度值(以TBA 调零)。按公式A532=-0.00198+0.088A450求出样品中糖分在532 nm处的吸光度值(A532), 用实测532 nm 的消光度值减去600 nm 非特异吸收的消光度值再减去A532,其差值为测定样品中丙二醛-硫代巴比妥酸(MDA-TBA)的消光度值。按丙二醛(Malondialdehyde, MDA)在532 nm 处的毫摩尔消光系数为155换算求出提取液中MDA 浓度。
    1.2.4  酸性茚三酮测定脯氨酸(Proline, Pro)含量[9]
    准确称取不同处理的待测植物叶片组织样品各0.2 g,用2 mL 3% 磺基水杨酸研磨提取,分别转移至试管中,在沸水浴中提取10 min,(提取过程中要经常摇动),冷却后,4000 rmp 离心10 min,将上清置于另一干净的带玻塞试管中,加入 2 mL 冰醋酸及2 mL 酸性茚三酮试剂,封口以防过分蒸发,在沸水浴中加热30 min,溶液即呈红色。冷却后加入4 mL 甲苯,摇荡30 s,静置2 h。吸取上层脯氨酸(Proline, Pro)红色甲苯溶液于比色皿中,以甲苯为空白对照,在分光光度计上测量520 nm 波长处吸光度,求得吸光度值,A520大小为0.2-0.8之间为佳,若值太高,应适当用甲苯稀释。配置标准溶液制作标准曲线,按照y = 0.0869x + 0.0052换算脯氨酸含量。
    1.2.5  叶绿素(Chlorophyll)含量测定[8,10]
    称取不同处理待测植物叶片组织样品0.05 g,置于7 mL 试管中,加入5 mL 95% 作为叶绿素(Chlorophyll)提取液,黑暗静置过夜至叶片组织完全变白。测定提取液在665 nm,649 nm 和470 nm 下的吸光度值(以95% 乙醇调零)。根据公式Ca=13.95A665-6.88A649, Cb=24.96A649-7.32A665, Cλc=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245计算出叶绿素含量。
    1.2.6  植物组织干鲜重比(Relative water content, RWC)及K+/Na+测定[11]
    取植株地上部分,装于样品袋中,称量样品鲜重(FW)并标注于样品的表面。将样品置于烘箱中完全烘干后,称量样品干重(DW),计算样品的干鲜重比确定植株地上部分相对含水量(Relative water content, RWC)。
    将烘干的植物组织样品研磨至粉末,并称取样品粉末0.05 g,置于用10% 稀硝酸酸泡过的微波消解石英管中,加1 mL 硝酸(分析纯)作为植物组织溶解剂,将石英管置于消解罐中,往罐中加入8 mL 去离子水,组装消解罐,将消解罐放入微波消解仪中微波消解1 h。微波消解后,将罐体冷却至室温。罐体冷却后打开微波消解罐,将石英管中的液体吸出,用去离子水定容至10 mL (使用10 mL 容量瓶之前,需将容量瓶在10% 稀硝酸中浸泡2 h 以上,以保证完全除去容量瓶中原有的钠和钾离子)。按照标准液配方表配制Na+和K+混合标准液,利用原子发射光谱仪(ICP)测量消解液中的Na+和K+含量,并计算K+/Na+。
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