们难免会吃到一些轻微发霉的食品,如何能找到一种温和的适用于人体的补救措施,是本文
的研究目的所在。研究表明乳酸菌对某些真菌生长与产毒有抑制作用,同时对已存在的毒素
亦有吸附作用[4~5]。而酸奶中含有丰富的乳酸菌,其中尤以嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌最为
常见,且民众对酸奶有着普遍较高的认同。因此选择身边最常见的酸奶品牌做菌种分离与鉴
定,增殖培养后选菌浓度最大的时候与AFB1混合振荡培养,考察菌种和酸奶对 AFB1的去除率。
本文探讨了酸奶中的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌对黄曲霉毒素B1的吸附能力,为日常
生活中喝酸奶缓解低量黄曲霉毒素B1提供了数据支持。
2 菌种的分离与鉴定
2.1 实验材料
2.1.1 菌种来源
伊利浓风酸乳(原) ,卫岗风酸牛奶(低脂) ,市购,均含 Str.thermophilus 与 L.
bulgaricus。
2.1.2 实验仪器与设备
MJ-54A 型高压蒸汽灭菌锅,SW-CJ-2FD 型洁净工作台,电子天平,低温培养箱,手持单道
可调移液器,加热磁力搅拌器,显微镜,冰箱,保鲜膜,保鲜袋。
2.1.3 主要试剂
胰蛋白胨,鱼蛋白胨,大豆蛋白胨,牛肉膏,酵母浸膏,抗坏血酸,柠檬三铵,柠檬酸钠,
无水乙酸钠,磷酸氢二钾,七水硫酸镁,七水硫酸锰,七水硫酸亚铁,甘油,吐温 80,乳糖,
葡萄糖,琼脂,氢氧化钠,氯化氢,草酸铵结晶紫,碘液,乙醇,沙黄染液。
2.1.4 培养基配制
嗜热链球菌选择培养基(改良 M17 培养基) :0.5%胰蛋白胨,0.5%鱼蛋白胨,0.5%牛
肉膏,0.25%酵母浸膏,0.05%抗坏血酸,0.025%七水硫酸镁,1%甘油,0.3%乳糖,0.5%
磷酸氢二钾,1.1%琼脂,蒸馏水 1000mL,pH 6.9±0.2,121℃灭菌 20min
保加利亚乳杆菌选择培养基(改良MRS 培养基) :1%大豆蛋白胨,0.8%牛肉膏,0.4%
酵母浸膏,2%葡萄糖,0.2%磷酸氢二钾,0.2%柠檬三铵,0.5%无水乙酸钠,0.02%七水硫
酸镁,0.004%七水硫酸锰,1.4%琼脂,0.1%吐温 80,蒸馏水 1000mL,pH 5.4,121℃灭菌
2.2 实验方法
2.2.1 菌种的初培养
将从学校超市采购的伊利牌和卫岗牌酸奶在工作台无菌环境下取样2mL,10 倍梯度稀释
3 次,得到 10
三个稀释度,装入棉花封口的无菌试管,从 10两个稀释度
的试管中按酸奶品牌、稀释度、接种方法、培养条件的不同分别取200µL的稀释酸奶液接种
于S.thermophilushermophilus和L. bulgaricus分离培养基, 剩余稀释酸奶液置于4℃冰箱备用,
平皿置于低温培养箱中 38.5℃培养 48h。观察不同的处理方法对菌种生长的影响,以在培养
基上长出 50~300 个菌落的为最佳。具体操作见表 2.1。
2.2.2 菌种的简略鉴定对照《伯杰氏细菌鉴定手册》肉眼观察各个培养皿中的菌落特征和生长情况并对比记录。
用无菌接种环挑选各个培养皿中有明显特征的菌落进行革兰氏染色,并置于显微镜下观
察菌种的微观形态。
2.2.3 菌种的分离纯化与保藏
选择长势最佳的培养皿,用无菌接种环挑取其中的菌落,采用平板划线分离法分离,每
个培养皿分离三个平行板,置于低温培养箱 38.5℃培养 24h,观察分离效果。培养完成后用
无菌接种环挑选线末单菌, 1/2进行革兰氏染色镜检, 1/2接种于S.thermophilus和L. bulgaricus
试 管 培 养 基 斜 面 进 行 纯 化 培 养 , 一 共 做 四 种 试 管 斜 面 , S.thermophilus. 伊 利
( S.thermophilus.Y )、 S.thermophilus. 卫 岗 (S.thermophilus.W) 、 L.bulgaricus. 伊 利 ( L.
bulgaricus.Y) 、L. bulgaricus.卫岗(L. bulgaricus.W),各类取长势最佳的置于4℃冰箱保藏,
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