菜单
1.2.2转基因植株构建
将番茄野生型模式植株Micro Tom种子经75%乙醇消毒1 min,2% 次氯酸钠溶液处理15 min,无菌蒸馏水洗涤6-10次后,以适当间距播种在MS培养基上,24-26℃暗培养3-4天后,转移到16h光照/8h黑暗下培养至子叶完全展开。番茄苗期2天时,平板划线法活化携带最终表达载体的农杆菌EHA105于LB平板上,28℃培养箱中倒置培养24h,将农杆菌接种于至少3支装有5ml LB液体培养基的试管中28℃摇菌近24h(LB固体、液体培养基均含有100 mg/L 卡那霉素、30 mg/L 利福平及载体携带对应抗性)。同一天取完全伸展的番茄子叶,切除其前后两段,留取中间约0.5cm叶片,近轴面朝上置于预培养基上,24℃-26℃正面置暗培养2天。5000 rpm/min 收集农杆菌并用MS培养液重悬农杆菌,OD600值调至0.4-0.6,置于5mL离心管中。取暗培养的番茄子叶组织块泡在菌悬液中25-30min后,用无菌滤纸吸干菌液,近轴面朝上置于共培养基上,24℃-26℃暗培养2天。无菌蒸馏水漂洗外植体6-10次,每次30min,后用终浓度为250mg/l的羧苄青霉素溶液漂洗30min。用无菌滤纸吸干菌液,近轴面朝上置于后培养基上,24℃-26℃,16h光照/8h黑暗培养3天。将外植体近轴面朝上转移到分化培养基上,每两周继代一次,至抗性芽分化。当抗性芽长到1cm时,切下抗性芽并将茎基部插入生根培养基中,当有大量根长出,洗净根部培养基并移栽到土壤中,24℃-26℃,16h光照/8h黑暗培养。
1.2.3转基因植株筛选
移栽到土壤中的番茄植株,待长至适当大小时,取新生的叶片0.1g,通过试剂盒提取番茄叶片DNA,并通过PCR验证是否过表达成功。
共3页:
上一页
1
2
3
下一页
上一篇:
中国槌角蝗科剑角蝗科昆虫的泛生物地理学分析
下一篇:
渭河南部流域底栖动物性状和功能多样性对不同空间尺度环境变量的响应关系
番茄逆境响应基因SlERF26的...
基因改性番茄后代分析
不同光质对番茄幼苗品质的影响
番茄青枯病的生物防治及温室促生实验研究
树番茄分化过程中对氯化钠敏感性的研究
利用PVX病毒技术初步探索...
PVX介导的SlymiR156促进番茄后熟的初步探究
中考体育项目与体育教学合理结合的研究
杂拟谷盗体内共生菌沃尔...
河岸冲刷和泥沙淤积的监测国内外研究现状
大众媒体对公共政策制定的影响
乳业同业并购式全产业链...
酸性水汽提装置总汽提塔设计+CAD图纸
十二层带中心支撑钢结构...
java+mysql车辆管理系统的设计+源代码
当代大学生慈善意识研究+文献综述
电站锅炉暖风器设计任务书
主页
计算机
机械
自动化
关闭菜单
栏目
毕业论文
计算机论文
经济论文
生物论文
数学论文
物理论文
机械论文
新闻传播论文
音乐舞蹈论文
法学论文
文学论文
材料科学
日语论文
英语论文
化学论文
自动化
管理论文
艺术论文
会计论文
土木工程
电子通信
食品科学
教学论文
医学论文
体育论文
论文下载
研究现状
任务书
开题报告
外文文献翻译
文献综述
范文
菜单
毕业论文
刷新
分享
收藏
关于
关闭
关闭
分享本页
返回
关闭
暂无收藏
全部清除
关闭菜单
About
751论文网手机版...
主页:
http://www.751com.cn
关闭
返回