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2.3.3硫化氢测定。
硫化氢测定采用亚甲基蓝法，并且需要使用用硫化钠溶液绘制标准曲线[13-14]。
N-N-二甲基对苯二胺的盐酸盐能够在含有高铁离子(Fe3+)的条件下与样品中硫离子反应生成亚甲基蓝，该物质在670 nm处有最大吸收峰。通常情况下需要添加锌离子(Zn2+)防止硫化氢在酸性条件下逸出。植物样品中硫化氢含量较低，因此排除了因硫化氢浓度过高和pH值过低导致逸出的情况，故不需要加入醋酸锌溶液以沉淀硫化物。
取0.2 g植物样品，用2 mL的20 mM的Tris-HCl溶液(pH=8.0)进行研磨，离心后取1 mL提取液用同浓度的Tris-HCl溶液稀释一倍，加入100 μL的30 mM 氯化高铁溶液（溶于1.2 M HCl）和100 μL的 20 mM N-N-二甲基对苯二胺溶液溶液（溶于7.2 M HCl）。以去离子水为空白对照测定670 nm处的吸光度。
使用0.2 M Na2S 的20 mM的Tris-HCl溶液进行标准曲线的绘制，将硫化钠的Tris-HCl溶液每次稀释一倍，共稀释18次，取2 mL的稀释液加入100 μL的30 mM 氯化高铁溶液（溶于1.2 M HCl）和100 μL的 20 mM N-N-二甲基对苯二胺溶液溶液（溶于7.2 M HCl）。以去离子水为空白对照测定670 nm处的吸光度。绘制并计算稀释8次至稀释18次的吸光度的标准曲线。
2.3.4 L-半胱氨酸脱巯基酶活性测定
由于目前测定植物样品中的L-半胱氨酸脱巯基酶的先例较少，故采用基于亚甲基蓝法的方式[15]测量L-半胱氨酸脱巯基酶催化反应L-半胱氨酸产生的产物[16-17]，并且需要使用醋酸锌溶液沉淀提取液中已有的硫化物。需要绘制标准曲线。
使用2 mL的20 mM的Tris-HCl溶液 (pH=8.0)在冰浴条件下研磨0.2g的冷冻植物样品，加入100 μL醋酸锌溶液，在冷冻离心机中以12000 rpm离心15分钟。取提取液稀释10倍后以100 μL的稀释液用反应液（含有0.3 mM的L-半胱氨酸和2.5 mM的二硫苏糖醇的100 mM Tris-HCl溶液，pH=9.0）在37℃下反应15分钟进行酶活测定。反应时间结束后加入100 μL的30 mM 氯化高铁溶液（溶于1.2 M HCl）和100 μL的 20 mM N-N-二甲基对苯二胺溶液溶液（溶于7.2 M HCl），以去离子水为对照测定670 nm处的吸光度，计算酶活。
2.4统计分析
选择至少6次实验结果的数据的平均值，使用t检验对数据进行显著性统计分析。
3.结果和分析
3.1 盐胁迫诱导内源性硫化氢含量提升
根据硫化钠标准溶液进行标准曲线绘制表1，经计算得标准曲线为 y = 0.0058x + 0.0719，相关系数符合要求(R2>0.99), 可测定浓度范围为1.5-400 μM。根据以往实验结果[14]该方法最低检出限为0.07 μM。