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    2、吸上清并分相：取上清液，转移至洁净的1.5 mL EP管中，向上清液中加入200 µL的氯仿，剧烈振荡混匀15 s，室温放置5 min。待溶液分层后，4 °C，12000 rpm离心10 min。
    3、吸上清并沉淀：取出上层水相（约0.6 mL）至洁净的1.5 mL EP管，加入等体积异丙醇，颠倒混匀。4 °C，12000 rpm离心10 min（可先在-20 °C放置5-10 min帮助沉淀）。
    4、洗涤RNA：弃上清液（注意不要倒出沉淀），加1 mL 75 %乙醇洗涤沉淀，4 °C，12000 rpm离心10 min。
    5、除尽洗液：弃上清液（尽量倒尽），short 10000 rpm离心10 s，用移液枪把管底75 %乙醇吸干。
    6、溶解并测浓度：在超净工作台上将EP管吹干，约5 min。随后，用20 μL DEPC水溶解沉淀。NanoDrop 2000测浓度。
    1．2．2  PCR引物设计
    PCR引物通过Primer Premier 5.0软件辅助设计。根据载体pGBKT7的质粒图谱，在引物两端分别加上合适的酶切位点和保护碱基
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