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摘要正常人的血浆中皆含有少量游离的胞外 DNA，称为循环 DNA；研究表明，在肿瘤发生的早期，肿瘤病人的血浆中游离 DNA 含量即明显高于正常人水平；作为一种新的生物标志物，血浆中游离核酸的检测具有取材简便，定量准确的特点，如能于临床领域得到应用，在疾病早期诊断方面将具有重大实际意义。本实验首先以健康小鼠和患病小鼠建立对照，选取合适的核酸提取办法，再引入 PCR 技术，比较正常小鼠与患病小鼠血浆中游离核酸含量，确认患病组的血浆游离核酸含量水平有明显升高；最后收集人血浆样本，通过实时定量荧光 PCR 技术，考查血浆中游离核酸与血浆总量的相关性，以论证测定方法是否具有准确的定量性。26728
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毕业论文关键词 游离核酸 血浆 肿瘤 PCR
Title One step technique of Quantify Serum Total DNA
Abstract
Circulating DNA is a free DNA in human plasma and human serum. Researches have shown that
the rise in circulating DNA level is associated with the occurrence and development of tumor. As
a new object of testing, circulating DNA is convenient for clinical use due to its accessibility and
the accuracy of the detection. Circulating DNA has a wide use in clinical oncology and cancer
research．In this study, normal mice and diseased mice were used to establish control model. We
select the optimal proposal of DNA extraction from a number of alternatives. Based on fact that
the content of serum DNA increased significantly in diseased group compared with the healthy
group, further experiments focus on human serum DNA PCR technology is introduced in this
study. We conclude that using serum free DNA as a biomarker in diagnosis of malignant tumor is theoretical.
Keywords Circulating DNA Serum Tumor PCR
目 次
1 引言 1
1.1 检测血浆中游离核酸的意义 1
1.2 实时荧光定量 PCR 技术 1
1.3 microRNA 的定量分析技术 1
2 血浆中游离核酸的提取 Y
2.1 实验材料、试剂与仪器设备 Y
2.1.1 主要实验材料 Y
2.1.2 试剂配置 Y
2.1.3 仪器设备 Y
2.2 实验方法 Y
2.2.1 血浆中游离核酸的提取 Y
2.2.2 琼脂糖凝胶电泳法检测提取物及其PCR产物 Y
2.3 实验结果 Y
2.4 讨论 Y
2.5 小结 Y
3 实时荧光定量 PCR 技术检测游离核酸 Y
3.1 实验材料、试剂与仪器设备 Y
3.1.1 主要实验材料 Y
3.1.2 试剂配置 Y
3.1.3 仪器设备 Y
3.2 实验方法 Y
3.3 实验结果 Y
3.4 讨论 Y
3.5 小结 Y
结论 Y
致谢 Y
参考文献Y
1 引言
近年来，恶性肿瘤的发病率及致死率正呈逐年上升的趋势，癌症已成为人类健康的主要
威胁。临床常见的肿瘤患者早期以接受手术治疗为主，辅以化疗和放疗，中晚期则无法通过
手术根治，需依赖化疗手段延长生存期。然而，以运用药物直接影响癌细胞的生长、增殖，
从而抑制、杀灭癌细胞为原理的治疗方法存在着显著的毒副反应，对患者的生存质量影响很
大，肿瘤细胞对化疗药物逐渐产生耐药性也限制了疗效的发挥；另一方面，接受手术治疗的
患者仍存在着较高复发可能，即术后生存率并未得到预期中的改善。
鉴于肿瘤的影像学检查极大地依赖于设备和检查者的技术，最终确诊仍须依靠活体组织