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农杆菌转化:取200μl农杆菌EHA105感受态细胞,加入10 0ul质粒DNA,冰浴30min,之后于液氮中冻3-5min,37℃水浴融合5min,再加入1mlYEB(或LB)液体培养基,28℃,震荡4h,10000rpm/min离心30秒,去上清,加入200μl YEB液体培养基悬浮细胞,涂布含有相应抗生素的YEB(或者LB)固体平板上,28℃培养2d观察菌落生长情况。
农杆菌对葡萄愈伤组织的遗传转化参考郭斌[11]的方法。
2 结果与分析
2.1 葡萄基因组总RNA的提取及cDNA合成
从巨峰葡萄总RNA的电泳检测结果(图2)能够看出,提取的总RNA电泳条带完整清晰,虽有微量降解,但不影响后续实验的进行。
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