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本次实验所用的木霉T-soybean为本实验室从大豆根部分离,而且已经成功从该菌株中克隆出几丁质酶基因并转入了拟南芥中。
1.材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验用菌
本次实验所用的木霉T-soybean为本实验室从大豆根部分离。
1.1.2 培养基
PDA培养基:土豆200g,葡萄糖20g,琼脂粉15g,pH6.0定容至1L;
产酶培养基:土豆200g,几丁质9g,pH6.0,定容至1L(根据研究的因素不同,几丁质浓度和pH值均有所变化)。
1.1.3 实验试剂
几丁质(10g):索莱宝
胶体几丁质制备(10g/L):称取1g几丁质添加2mL蒸馏水充分研磨,然后转移到烧杯中并添加18mL浓盐酸混匀,4℃放置24h然后用
化学
分析滤纸过滤到50mL的蒸馏水中,再用氢氧化钠溶液调定至pH7.0,最后用蒸馏水定容至100ml并至于4℃的环境保存[8]。
DNS溶液(使用前一周配制好):取500mL的dH2O,然后依次称取酒石酸钾钠、3, 5-二硝基水杨酸、氢氧化钠分别是182g、 6.3g、21.0g,在50℃加热搅拌直至溶解,再称取5.0g的苯酚搅拌直至完全溶解,冷却到室温后定容至1L,贮于棕色瓶,室温中保存[9]。
考马斯亮蓝R-250染色液:向烧杯中加入1g考马斯亮蓝,然后依次加入异丙醇,冰醋酸,蒸馏水分别为250mL,100mL,650mL,最后搅拌混匀,过滤除去不容物质,室温保存[10]。
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