菜单
  

    1材料与方法
    1.1试验所需仪器
    载玻片,接种针,烧杯,锥形瓶,玻璃棒,试管,隔水式恒温培养箱,天平,医用净化工作台,蒸汽高压灭菌锅,酒精灯,水浴锅,显微镜等。
    1.2富集培养基
        试验所需富集培养基原液及培养基配置表见表1和表2。所有溶液配置好后,储存于4℃。文生素溶液使用前需用0.22μm无菌滤膜过滤于灭菌的血清瓶中备用,两周内用完。

    表1 富集培养基原液配置表
    微量元素溶液:
    Na4EDTA:500mg;     FeSO4.7H2O:200mg;
    MnCl2.4H2O:200mg;  ZnSO4.7H2O:10.0g;
    H3BO3:30mg;        CoCl2.6H2O:20mg;
    CuCl2.2H2O:1mg;     NiCl2.6H2O:2mg;
    FeCl3.6H2O:8.0g;
    加蒸馏水至100ml    0.1%(w/v)刃天青溶液:
    100mg溶解于100ml蒸馏水盐溶液 1:
    K2 HPO4:1.46g;
    加蒸馏水至1000ml
    盐溶液2:
    KH2PO4:1.46g
    Na2SO4:2.4 g
    NaCl:2.4g
    MgSO4.7H2O:0.5g
    CaCl2.2H2O:0.02g
    加蒸馏水至1000ml    文生素溶液:
    文生素B6:200mg ;    硫辛酸:100mg;
    文生素B2:200mg;     对氨基苯甲酸:10mg;
    文生素B1:200mg;     叶酸:5mg;
    烟酰胺:200mg;        生物素:5mg;
    泛酸:200mg;          辅酶B12:5mg;
    加蒸馏水至1000ml
    表2 富集培养基配置表
    原液    体积/重量        原液    体积/重量
    盐溶液1    200ml        微量元素溶液    10ml
    盐溶液2    200ml        0.1%刃天青溶液    1ml
    酪蛋白氨基酸    15g        半胱氨酸盐酸盐    0.6g
    NaCO3    4g        文生素溶液    0.1ml/10ml(灭菌后添加)
    加蒸馏水至1000ml                
    1.3继代培养及样品采集和分析
    以3头安装有瘤胃瘘管的奶牛瘤胃液为接种材料,瘤胃液经过滤后(四层纱布),接入到预先预热至39℃的两种富集培养基里,每个处理四个重复,间隔24h以10%(v/v)的接种量传代一次,连续传代7次。第1-7代每次传代后立即采集24h培养物,用于吸光度和氨氮浓度的测定。使用分光光度计测定培养液吸光度,采用比色法方法测定发酵液氨态氮浓度[8],详细测定步骤如下:
    A、氨氮标准系列溶液制备
    ① 用0.2M的盐酸溶解精确称取的0.382g氯化铵,然后定容至100ml,在冰箱中可存放数月,用作保存液,
    ② 用量筒量取10ml的保存液,用蒸馏水稀释定容至100ml,含氮量为10mg/100ml作为工作液。
    ③ 取五个编号的,50ml容量瓶,准确量取工作液0、1、2、4、6ml,接着分别加入蒸馏水10、9、8、6、/4ml,使之都成为10ml,再用0.2M盐酸定容。这便是的标准系列溶液。(每100ml中含氮量分别是0、0.2、0.4、0.8、1.2mg)
    B、比色与计算
        ① 用5个10ml的试管,精确量取标准系列溶液0.4ml,加入试管中,再在各个试管中按顺序,加入D液和E液(D液:称取0.08g亚硝基铁氰化钠溶解于100ml 14%水杨酸钠溶液中;E液:量取2ml次氯酸钠溶液,商品名安替福明,含活性氯5.2%),然后与100ml 0.3M氢氧化钠溶液混合,摇匀,静置10分钟之后比色。波长700nm,0.5cm的比色皿,将不含氮的0号管液作空白对照。记录各消光值。
  1. 上一篇:砧用南瓜品种资源抗旱性鉴定
  2. 下一篇:基于Akt信号通路研究黄体期营养水平及静脉注射葡萄糖对湖羊卵泡发育的影响
  1. 淮安市高效园艺发展状况调研

  2. 高效降解纤维素菌株的筛选

  3. 高效异养硝化菌的筛选及鉴定

  4. 奶牛肠道真菌群落组成研究

  5. 奶牛CSN1S1基因克隆及其可...

  6. 奶牛乳腺ACBD6环形RNA的克隆与验证

  7. 高效矿物风化细菌假单胞...

  8. java+mysql车辆管理系统的设计+源代码

  9. 乳业同业并购式全产业链...

  10. 酸性水汽提装置总汽提塔设计+CAD图纸

  11. 中考体育项目与体育教学合理结合的研究

  12. 电站锅炉暖风器设计任务书

  13. 十二层带中心支撑钢结构...

  14. 河岸冲刷和泥沙淤积的监测国内外研究现状

  15. 当代大学生慈善意识研究+文献综述

  16. 大众媒体对公共政策制定的影响

  17. 杂拟谷盗体内共生菌沃尔...

  

About

751论文网手机版...

主页:http://www.751com.cn

关闭返回