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摘要：热胁迫能够影响微生物的生长发育，是一种常见的环境胁迫因子。研究表明，热胁迫可以影响灵芝的正常生命活动，并诱导其体内的ROS的积累，而高浓度的ROS能够对生物体产生氧化损伤。Rho1是一种GTP酶信号蛋白，可以赋予细胞抵御热胁迫损伤的能力。我们发现热胁迫下灵芝野生型菌株Rho1的表达量显著上调。同时我们利用灵芝rho1沉默菌株，研究了热胁迫下Rho1对灵芝菌丝生长、灵芝三萜合成、ROS浓度及相关酶活性的影响，发现rho1沉默菌株在热胁迫及正常情况下的灵芝三萜含量、ROS浓度均显著高于野生型菌株。以上结果表明，Rho1通过降低热胁迫引起的ROS的积累，削弱了热胁迫对灵芝三萜合成的诱导作用。32148
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毕业论文关键词：Rho1；热胁迫；灵芝酸； ROS
Preliminary Study on the Participation of Rho1
in the Heat Stress Regulation of Ganoderic Acids Biosynthesis
Abstract：Heat stress is a common environmental stress which affects the growth and development of microorganisms. Studies have shown that heat stress can affect the normal life activities of Ganoderma lucidum and induce the accumulation of ROS in it, while high concentrations of ROS can cause oxidative damage to organisms. Rho1 is a GTP enzyme signal protein that gives cells the ability to resist heat stress. Here the expression of Rho1 in the wild-type Ganoderma lucidum strains increased significantly on the heat stress is found by us. The effects of Rho1 are also found on mycelia growth, ganoderic acids biosynthesis, ROS concentration and the activity of related enzymes in Ganoderma lucidum under heat stress, using rho1 silencing strains. The results indicate that the content of ganoderic acids and ROS concentration in rho1 silencing strains are significantly higher than the wild type whether under heat stress or normal condition. Collectively, all these results shows that Rho1 impairs the heat stress induction of ganoderic acids biosynthesis through reducing ROS accumulation caused by heat stress.
Key words: Rho1；Heat stress；ganoderma acid；ROS
目 录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1材料 4
1.1.1菌株及试剂4
1.1.2菌株培养..4
1.2方法 4
1.2.1热胁迫处理方法4
1.2.2三萜含量测定.4
1.2.3灵芝总RNA的提取及cDNA的制备5
1.2.4基因表达量的测定..5
1.2.5 ROS荧光检测.5
1.2.6酶活性的测定5
1.2.7统计分析方法6
2结果6
2.1热胁迫下，rho1表达上调6
2.2 Rho1参与热胁迫调控灵芝的生长发育7
2.3 Rho1参与热胁迫调控灵芝酸含量7
2.4 Rho1参与热胁迫调控灵芝体内的ROS8
3讨论9
致谢...............10
参考文献...........10
ho1参与热胁迫调控灵芝三萜生物合成的初步研究
灵芝三萜是灵芝的关键药用成分之一，对多种疾病的辅助治疗具有重要作用。三萜类化合物属于类异戊二烯，异戊二烯是三萜类化合物母核的重要组成成分。灵芝酸是灵芝三萜最主要的成分。灵芝三萜化主要通过类异戊二烯途径进行合成，即由乙酰通过甲羟戊酸(MVA)代谢途径，合成异戊二烯焦磷酸和二甲基烯丙基焦磷酸，并以此为底物，经过法尼基焦磷酸、鲨烯、鲨烯-2,3-氧化物和羊毛甾醇等中间体，最后经过一系列氧化、环化反应形成[1]。
热胁迫是指当温度高于某一个温度阈值并持续一段时间的条件下，对生物生长和发育造成的不可逆抑制。热胁迫条件下，植物的生物膜分子间的化学键会发生断裂，并使得生物膜上的蛋白变性，导致生物膜的流动性增加和细胞内部细胞器的正常生理活动发生紊乱，从而影响生物的正常生长发育[2]。近几年的实验研究中证明，热胁迫下，烟曲霉的菌丝会变长，极性生长减小，生物膜变薄，侵染力降低[3]；白色念珠菌的酵母形态与菌丝形态之间的转变会受到高温的影响，并改变其对宿主的侵染能力[4]；米曲霉菌丝尖端会在热胁迫下形成应激颗粒[5]；高温胁迫下，嗜盐四联球菌存活率显著降低[6]。研究表明，热胁迫会诱导嗜热微生物体内的抗氧化蛋白质的表达，并使得细胞内的甘油合成途径相关蛋白上调[7]。热胁迫可以引起微生物的代谢失调，严重影响微生物的生长发育甚至导致其死亡。因此，生物为了抵御热胁迫造成的伤害，具有固着生活特点的微生物只能通过启动体内各种应激反应来抵御热胁迫。