无土对照:不加土样,其他操作与样品实验相同。
无基质对照:以等体积的水代替基质,其他操作与样品实验相同。
1.4.1.3 结果计算
蔗糖酶活性以24h后,1g干土生成葡萄糖毫克数表示。
蔗糖酶活性=(a样品-a无土-a无基质)×V×n/m
a样品、a无土、a无基质分别表示其由标准曲线求的葡萄糖毫克数;V为显色液体积;n为分取倍数,浸出液体积/吸取滤液体积;m表示烘干土重。
1.4.2 土壤淀粉酶活性的测定
1.4.2.1 试剂
(1)1%淀粉 (2)甲苯
(3)pH5.6磷酸盐缓冲溶液 (4)3,5-二硝基水杨酸溶液
(5)麦芽糖标准溶液
1.4.2.2 操作步骤
称5g风干土,置于50mL的三角瓶中,注入10mL1%淀粉溶液,再10mLpH5.6磷酸盐缓冲溶液和5滴甲苯。摇匀混合物后,放入恒温箱,在37℃下培养24h。培养结束后,将悬液迅速过滤。从中吸取滤液1mL,注入50mL容量瓶中,加2mL3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min,随即将容量瓶移至自来水流下冷却,定容后在分光光度计上于波长508nm处进行比色测定。
1.4.2.3 结果计算
淀粉酶活性以24h后,1g干土生成麦芽糖毫克数表示。
淀粉酶活性=(a样品-a无土-a无基质)×V×n/m
a样品、a无土、a无基质分别表示其由标准曲线求的麦芽糖毫克数;V为显色液体积;n为分取倍数,浸出液体积/吸取滤液体积;m表示烘干土重。
1.4.3 土壤脲酶活性的测定
1.4.3.1 试剂
(1)甲苯 (2)10%尿素
(3)柠檬酸盐缓冲液(pH6.7) (4)苯酚钠溶液(1.35mol/L)
(5)次氯酸钠溶液(活性氯的浓度为0.9%)
(6)氮的标准溶液
1.4.3.2 操作步骤
(1)称取5g风干土样于100mL容量瓶中。
(2)向容量瓶中加入1mL甲苯(以能全部使土样湿润为度)并放置15分钟。
(3)之后加入10mL10%尿素溶液和20mL柠檬酸盐缓冲液(pH6.7),并仔细混合。
(4)将容量瓶放入37℃恒温箱中,培养24h。
(5)培养结束后,用热至38℃水稀释至刻度,仔细摇荡,并将悬液用致密滤纸过滤于三角瓶中。
(6)显色:吸取3mL滤液于50mL容量瓶中,加入10mL蒸馏水,充分震荡,然后加入4mL苯酚钠,仔细混合,再加入3mL次氯酸钠,充分摇荡,放置20分钟,用水稀释至刻度,溶液呈现靛酚的蓝色。
(7)1h内在(靛酚的蓝色在1h内保持稳定)在分光光度计上用1cm液槽,于578nm处将显色液进行比色测定。
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