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摘要：组蛋白（histones）为真核生物体细胞染色质中的碱性蛋白质和基本结构蛋白，含较多精氨酸和赖氨酸等碱性氨基酸，二者加起来约为所有氨基酸残基的1/4。因其氨基酸成分和分子量不同，主要分成5类：H1、H2A、H2B、H3、H4。它们富含带正电荷的碱性氨基酸，能够同DNA中带负电荷的磷酸基团相互作用[1]。而本实验涉及到的酵母组蛋白是一种有别于其他动物组织的组蛋白，它属于真核生物，在提取其组蛋白时，需要破裂其组织细胞壁。提取之后，再利用一种高效又普遍的方法进行蛋白的测定——过程包括考马斯亮蓝染色、蛋白质印迹法（western blot）转膜后杂抗体(一抗和二抗)；通过IMAGE影像曝光法，最后得出蛋白条带的曝光图[2]。5674
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关键词：酵母组蛋白的提取；破裂细胞壁；蛋白质印迹法；杂抗体；曝光；
Optimization and Exploration Of the Extraction Method on Yeast Histone
Abstract: Histone is the basic protein and basic structure in eukaryotic somatic chromatin, containing more basic amino acids such as arginine and lysine, which add up to approximately one forth of the total amino acid residues. Due to its different amino acid composition and molecular weight, it can be pided into five categories: H1, H2A, H2B, H3 and H4. They are rich in basic amino acid with a positive charge, so they can have the interaction with the phosphate groups which are negatively charged in DNA. This experiment is related to the yeast histone which is different from those of other animal tissues. It belongs to the eukaryotic. It is necessary to rupture the cell wall of the organization when extracting its histone. After this kind of process, then detect the histone with a general and efficient method, including Coomassie blue staining, Western blot, film transferred, using antibodies(the primary and secondary antibody) and image exposure. At last, we can have the protein bands exposure map.
Keywords: the extraction of the yeast histone; rupture the cell wall; western blot; the use of the antibody; exposure
目 录
1 引言 1
1.1 课题的意义 1
1.2 课题的目的 2
2 组蛋白及其性质的研究3
2.1 组蛋白的简介 3
2.2 组蛋白研究概况 4
2.3 组蛋白在科学领域中的应用 5
2.4 SDS-PAGE 聚丙烯凝胶电泳实验7
2.5 Western blot 蛋白质印迹法实验8
3 实验部分 9
3.1 实验仪器 9
3.2 实验化学试剂 10
3.3 实验材料 12
3.4 提取分离 13
4 结果和讨论 16
4.1 分离所得组蛋白的曝光条带图 16
4.2 数据记录 18
4.3 实验总结 19
致谢 22
参考文献 23
1 引言
1.1 课题的意义
随着人类基因组计划的实施和推进，生命科学研究已进入了后基因组时代。在这个时代，生命科学的主要研究对象是功能基因组学，包括结构基因组研究和蛋白质组研究等。尽管现在已有多个物种的基因组被测序，但在这些基因组中通常有一半以上基因的功能是未知的。目前功能基因组中所采用的策略，如基因芯片、基因表达序列分析等，都是从细胞中mRNA的角度来考虑的，其前提是细胞中mRNA的水平反映了蛋白质表达的水平[3]。但事实并不完全如此，DNA 、mRNA、 蛋白质，存在三个层次的调控，即转录水平调控，翻译水平调控，翻译后水平调控。从mRNA角度考虑，实际上仅包括了转录水平调控，并不能全面代表蛋白质表达水平。实验也证明，组织中mRNA丰度与蛋白质丰度的相关性并不好，尤其对于低丰度蛋白质来说，相关性更差。更重要的是，蛋白质复杂的翻译后修饰、蛋白质的亚细胞定位或迁移、蛋白质－蛋白质相互作用等则几乎无法从mRNA水平来判断。毋庸置疑，蛋白质是生理功能的执行者，是生命现象的直接体现者，对蛋白质结构和功能的研究将直接阐明生命在生理或病理条件下的变化机制[4]。