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材料与方法
1.1 材料及药品
北京农科院提供京-17品系小麦种子;lacl3(10mM)母液;改良苯酚品红;解离液。
1.2 实验方法
1.2.1 小麦种子萌发及生根处理
设置对照组(蒸馏水培养即可),配置0.5 mM、1.0 mM、1.5 mM、2.0mM浓度梯度的lacl3+溶液,找五个大小适宜的培养皿,清洗后擦拭干净,在每个培养皿下面垫上滤纸,选取250粒大小均匀、健康小麦置于5个培养皿中,每个培养皿放50个小麦种子,分别中加入等量的蒸馏水和不同浓度梯度的处理液,使种子半浸于处理液。避光22℃恒温处理36小时。
1.2.2 根长统计
分别测量对照组和0.5 mM、1.0 mM、1.5mM、2.0mM lacl3+溶液处理组的小麦主根长,记录各个组每个小麦的主根长。并用graph 5软件作图进一步分析各组的差异。
1.2.3 DNA提取
选择与对照组差异明显的浓度处理组,采用CTAB法提取分别提取对照组和选取组的DNA。(CTAB法提取DNA的大致步骤[14]:1.在液氮条件下快速研磨,加预热的CTAB,水浴。2.冷却后加氯仿、异戊醇,再离心取上清液,重复上面操作。3.再取上清液加一定量的无水乙醇、离心。4.加TE缓冲液溶解、离心5.取上清加乙酸钠、无水酒精,再离心弃上清6.加无水乙醇去除各离子,沉淀DNA溶于TE溶液7.CsCL密度梯度离心加以纯化)。
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