- 上一篇：红茶菌混合菌种的分离与鉴定
- 下一篇：三七中总皂甙的提取及其抗氧化性研究
1.3.2.2.9 VP试验（vp培养基）
将芽孢菌接种于vp培养液中， 适温培养 4-6 d。取培养液（约 2 mL）和等量的 40 % NaOH 相混合，加少量（0.5-1.0 mg）5% α-萘酚无水乙醇溶液，充分振荡 2-5 min，如培养液出现红色即为阳性。若无红色出现，则静置于37℃恒温箱，2 h后仍不显现红色即可判定为阴性[9]。
1.3.2.3 分子生物学鉴定
采用16sRNA鉴定手段，由上海生工公司完成。
1.3.2.4 种属鉴定
根据各菌株的菌落特征、镜检特征、生理生化特性，参照伯杰氏细菌鉴定手册和张纪忠微生物分类学进行菌种的种属鉴定[14]。
1.3.3 功能特性研究
1.3.3.1 淀粉酶试验（淀粉培养基）
将菌株接种于淀粉液体培养基中2-4 d后，在菌落周围滴加碘液，如菌落周围呈现透明圈，表示菌种产生淀粉酶[15]。
1.3.3.2 纤文素酶试验（纤文素刚果红培养基）
取18-24 h的培养物点于平板上，每皿可点种3-5个菌株，适温培养2-4 d，形成菌落后，观察产生透明圈情况，产生纤文素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈[15]。
1.3.3.3 蛋白酶试验（酪素培养基）
将适量芽孢菌划线于或适当稀释涂布于酪素培养基，35℃-37℃ 24-48 h，菌落周围出现透明圈说明酪素被水解[16]。
1.3.3.4 果胶酶试验
将纯化好的菌种接种于果胶酶平板上培养，3-5 d后，观察产生透明圈情况，若果产生透明圈则说明该菌株产果胶酶[10]。
1.3.3.5 酯化酶试验
将适量芽孢菌点种在产酯化酶固态培养基中，37℃培养2-4 d，形成菌落后，观察产生透明圈情况，透明圈越大，产酯化酶能力越强[17]。
1.3.3.6 产香功能(产香试验)
发酵培养基取培养18-24 h菌种接入到发酵培养基中，摇床37℃培养48-60 h，取出，鉴定是否产生香型物质。
鉴定标准：倒发酵液于标准评酒杯至三分之二容量约30 mL，在白纸或白台布的衬映下仔细观察颜色。 手持酒杯平行以顺时针或逆时针方向轻摇 3-4 次，置鼻子下端1-3 cm 处，先轻轻吸气再呼出，如此反复 2-3 次，每次中间可间隔 3-5 s， 记录发酵液是否产香和香强度[7]。
1.3.3.7 产酸功能
采用产酯化酶液态培养基培养芽孢菌，37℃培养2-4 d，在测定酯化酶活力时测定培养液pH。
1.3.4 数量优势芽孢菌的生长特性研究
1.3.4.1 温度对优势芽孢菌的生长影响
采用牛肉膏蛋白胨培养基，选择30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃，培养2-3 d，观察优势芽孢菌生长的情况。
1.3.4.2 pH值对优势芽孢菌生长的影响
采用牛肉膏蛋白胨培养基，选择最适生长温度，设置pH值3.5、4.5、5.5、6.5、7.5、8.5，培养2-3 d，观察优势芽孢菌的生长情况。
1.3.4.3 糖度对优势芽孢菌生长的影响
采用牛肉膏蛋白胨培养基，选择最适生长温度和pH值，配制初始葡萄糖质量分数分别为3%、6%、9%、12%、15%、18%、21%，培养2-3 d，观察优势芽孢菌的生长情况。
1.3.4.4 乙醇度对优势芽孢菌生长的影响
采用牛肉膏蛋白胨培养基，选择最适生长温度和pH值，设置酒精度为0、2%（V/V）、4%、6%、8%、10%、12% 的液体培养基，培养2-3 d，观察优势芽孢菌的生长情况。
1.3.5 数量优势芽孢菌功能特性的研究
1.3.5.1 温度对优势芽孢菌功能的影响
采用发酵培养基，选择30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃培养36 h，测定优势芽孢菌的产酶能力、产香能力、产酸能力。
1.3.5.2 pH值对优势芽孢菌功能的影响
采用发酵培养基，选择最适产酶温度，设置pH值3.5、4.5、5.5、6.5、7.5、8.5，培养36 h，测定优势芽孢菌的产酶能力、产香能力、产酸能力。