互隔交链孢菌的分离鉴定及抑菌研究

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摘要从腐败变黑的大蒜中分离得到DSJ菌株。通过菌落形态观察，以及rDNA ITS克隆与测序等方法，鉴定出DSJ菌株为互隔交链孢菌。实验结果表明淀粉酶芽孢杆菌对DSJ菌株有显著的抑菌作用，抑菌率高达87%以上，其抑菌性研究将具有重要的应用前景。44035

A fungus strain named DSJ was isolated from the degenerative garlic. The strain was identified as Alternaria alternata based on colonial morphology, rDNA ITS sequence clone and homology analysis . The experiment results showed Bacillus amyloliquefaciens had significant bacteriostatic effect against Alternaria alternata ，whose inhibitory rate was more than 87%. So its bacteriostasis research will have an important application prospect.

毕业论文关键词：ITS鉴定；PCR扩增；互隔交链孢菌；解淀粉芽孢杆菌；抑菌

Keyword: ITS Identification； PCR amplification； Alternaria alternata；Bacillus amyloliquefaciens；Bacteriostasis

摘要 2

引言 4

一、材料和方法 5

1.1材料 5

1.2方法 6

1.2.1菌种分离鉴定 6

1.2.1.1 DNA提取及电泳检测 6

1.2.1.2 ITS序列PCR扩增 6

1.2.1.3 扩增片段检测及割胶回收 6

1.2.1.4感受态细胞制备 7

1.2.1.5 连接及转化 7

1.2.1.6 克隆及鉴定 7

1.2.1.7 ITS序列分析 7

1.2.1抑菌研究 8

二、结果与分析 8

2.1菌种分离鉴定 8

2.1.1形态观察 8

2.1.2 PCR扩增 8

2.1.3连接、转化及克隆 9

2.1.4序列分析 9

2.2抑菌研究 10

三、讨论 14

参考文献 14

致谢 15

引言

链格孢属(Alternaria)真菌属于有丝分裂孢子真菌类群丝孢纲丝孢目，它营腐生或植物内非致病或致病性的寄生。链格孢属真菌可在田间、运输和储藏过程中导致农作物霉变，因为其适宜在低温潮湿的环境下生长繁殖，所以是导致水果、蔬菜及冰箱储存食品腐败变质的主要微生物之一，同时也是引起植物病害的重要真菌类群之一。据报导链格孢属真菌能侵染100多种植物，引起近400种植物疾病病害[1]，包括各种主要经济作物：如苹果、西兰花、菜花、胡萝卜、柑桔、梨、草莓、西红柿、大米、土豆和烟草，以及许多观赏植物和各类杂草。由于其广泛的宿主种类和全球范围性的分布，链格孢属真菌造成了严重的经济损失。链格孢属真菌的致病机理复杂，主要分为几个方面：机械穿透、降解酶的作用及代谢产物等。其中最重要的致病原因可能是由于其含有多种植物毒素[2]，尤其寄主选择性毒素（HSTs）的合成是发病机理的关键一环[3]。除了HSTs，许多链格孢属真菌还能产生非寄主选择性毒素，如BrefeldinA，Altertoxin和tentoxin[4] ；一些链格孢属真菌还可以产生一种霉菌毒素，这种毒素对人类和动物有害[5]；另外某些链格属真菌能够引起人的上呼吸道感染和哮喘[6]。