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(5) 考马斯亮蓝R-250染色液
考马斯亮蓝R-250 0.5g
异丙醇 125mL
冰醋酸 50mL
用蒸馏水溶解,定容至500mL(会有些许颗粒残留,可用滤纸除去颗粒物质),室温保存。
(6) SDS-PAGE凝胶脱色液
无水乙醇 25mL
冰醋酸 50mL
用蒸馏水溶解,定容至500mL,室温保存。
1.3.3 菌种的活化
按分子克隆的操作活化菌种如下:
① 将菌种(转入了大肠杆菌DH5α的重组质粒PET52b-Laccase)冻藏管置于冰上解冻,但不要待其融化完(避免反复冻融菌种而致使菌种死亡),无菌操作下(超净工作台)用接种环将少许菌液划线于加有抗生素Amp(50ug/mL)的LB平板复壮,并将冻藏管马上放回-80℃冰箱。
② 将平板置于37℃恒温培养箱培养过夜,第二天挑取单菌落即可。
③ 挑选茁壮的菌落,接种到液体培养基LB(含Amp,50ug/mL)中培养37℃,180rpm过夜培养,并进行二次活化,得到生长良好活性高的菌落。
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