紫外线辐射污染是我们当今世界上面临的严重的环境问题。近些年以来,有大量的研究者针对植物的生理特性、生长、形态受紫外辐射的影响这一问题做了许多的研究[1-3]。据研究[4-7],在紫外辐射胁迫下,植物的生命力将会下降。
已经有实验证明,在紫外辐射胁迫下,小麦、菠菜、油菜、玉米和大豆的叶绿素含量会下降10~70个百分点,继而影响农作物生长发育乃至产量。最近的研究表明[8-11],植物叶绿素的合成过程在稀土元素铈的作用下有促进作用。本实验拟研究铈对紫外辐射胁迫下油菜幼苗叶绿素含量的影响,主要探明紫外辐射胁迫对油菜幼苗的影响程度,以及稀土元素里的铈元素对紫外辐射胁迫的抵制作用。旨在理论上阐明紫外辐射胁迫对植物的损伤机理,在生产实践过程中提供缓解和抵抗紫外辐射胁迫对农作物损伤的新方法。
1. 材料与方法
1.1 实验材料
油菜种子,购于周口市种子公司。
1.2 试剂
次氯酸钠、乙醇、氯化铈等,由所在学校本院系实验室提供。
1.3 实验方法
1.3.1 氯化铈溶液的配制
取氯化铈10 mg,加入适量的蒸馏水溶解,然后移入1000 mL容量瓶中加蒸馏水定容至1000 mL,配制出10 mg/L的氯化铈溶液。同样方法依次配制出20,30,60, 100 mg/L的氯化铈溶液,保存备用。
1.3.2 油菜种子的消毒、浸泡
在25 ℃室温下,将油菜种子先用5%的次氯酸钠浸泡20 min,用蒸馏水冲洗3遍后再用蒸馏水浸种12 h。
1.3.3油菜幼苗的培养及实验处理
在25 ℃的室温下,将浸泡了12 h后的油菜种子分为四组。第一组设定为对照组,正常条件下培养(既不进行紫外辐射胁迫处理也不做氯化铈喷洒处理),每天早上10:00用蒸馏水喷洒1次,直至幼苗长出2~4片真叶;第二组设定为氯化铈喷洒处理组,每天早上10:00分别用不同浓度的氯化铈溶液喷洒1次,直至幼苗长出2~4片真叶;第三组设定为紫外辐射胁迫处理组(不做氯化铈喷洒处理),此组先按照对照组方法培养出长出2~4片真叶的幼苗,然后进行紫外辐射胁迫处理,一部分幼苗每天紫外辐射胁迫6 h,胁迫1 d即可,另一部分幼苗每天紫外辐射胁迫6 h,连续胁迫2 d;第四组设定为紫外辐射胁迫加氯化铈喷洒处理组,此组先按照第二组方法培养出长出2~4片真叶的幼苗,然后按照第三组方法进行紫外辐射胁迫处理,每次辐射结束后,分别用10,20,30,60,100 mg/L的氯化铈溶液均匀喷洒油菜幼苗叶面,以叶面不滴落液滴为准,每次喷洒量应保持一致。第二组、第三组和第四组处理结束后,幼苗需恢复培养1 d,然后分别取各组叶片,测定叶绿素含量。
1.3.4叶绿素含量的测定
称取0.1 g油菜幼苗叶片后剪碎,放入25 mL的容量瓶里,加入95%的酒精至叶片浸没,加盖后放置在37 ℃黑暗的培养箱里保温24 h,直到叶片变白,再次添加95%乙醇至容量瓶刻度线进行定容,利用分光光度计在665,649 nm下进行比色。测定时每种处理设置3个重复,用平均值表示叶绿素含量,以确保所测数值的准确性。